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万疆生物常用佐剂的种类和制备
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简介: 佐剂主要可分为两种:一种本身具有免疫原性,如百日咳杆菌、抗酸杆菌(结核分枝杆菌)以及革兰阴性杆菌等;另一种本身无免疫原性,如氢氧化铝、磷酸钙、矿物油乳剂、表面活性剂等。目前应用最多的是弗氏佐剂(Freund adjuvant)。 1.弗氏佐剂 弗氏佐
简介: 佐剂主要可分为两种:一种本身具有免疫原性,如百日咳杆菌、抗酸杆菌(结核分枝杆菌)以及革兰阴性杆菌等;另一种本身无免疫原性,如氢氧化铝、磷酸钙、矿物油乳剂、表面活性剂等。目前应用最多的是弗氏佐剂(Freund adjuvant)。 1.弗氏佐剂 弗氏佐剂是目前动物实验中最常用的佐剂,分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。不完全弗氏佐剂是液体石蜡与羊毛脂混合而成,组分比为1~5:1,可根据需要而定,通常为2:1。不完全佐剂中加卡介苗(最终浓度为2~20mg/ml)或死的结核分枝杆菌,即为完全弗氏佐剂。上述佐剂经高压灭菌后,低温保存备用。 在免疫动物前,先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合,制备成 "油包水"乳状液。佐剂和抗原体积比一般为1:1。佐剂与抗原乳化可按如下方法进行: (1) 研磨法:先将佐剂加热并取适量放入无菌的玻璃研钵内,待冷却后再缓缓滴入等体积的抗原溶液,边滴边按同一方向研磨,滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后,继续研磨一段时间,使之成为乳白色粘稠的油包水乳剂。本法适于制备大量的佐剂抗原,缺点是研钵壁上粘附大量乳剂,抗原损失较大。 (2) 注射器混合法:将等量的弗氏佐剂和抗原溶液分别吸入两个注射器内,两注射器之间以一细胶管相连,注意排净空气,然后交替推动针管,直至形成粘稠的乳剂为止。本法优点是容易做到无菌操作,适用于制备少量的抗原乳剂。 制备好的乳化剂经鉴定才能适用。鉴定方法是将乳化剂滴入冷水中,若保持完整不分散,成滴状浮于水面,即乳化完全,为合格的油包水剂。 2.氢氧化铝佐剂 取5%硫酸铝溶液250ml,在强烈搅拌下加入5%氢氧化钠溶液100ml,用生理盐水离心洗涤沉淀2次,再悬入生理盐水中使达250ml。免疫接种时,取适量氢氧化铝佐剂加等体积抗原即可免疫。 3.明矾佐剂 钾铝矾(硫酸铝钾)在一定pH条件下产生氢氧化铝胶体吸附抗原而产生佐剂效应。制备方法是用生理盐水溶解蛋白质抗原,在搅拌下缓慢滴入一定量10%硫酸铝钾溶液,用NaOH调pH到6.5,此时溶液变成乳状悬液,离心后去掉上清液,沉淀用生理盐水洗涤二次,加入硫柳汞防腐,4℃保存备用。明矾佐剂一般用于肌肉注射,皮下注射容易引起肉芽肿和脓肿。 4.脂质体 脂质体包封抗原后,可使抗原延缓释放,并且脂质体颗粒有刺激机体免疫反应的作用。因此,用脂质体包封的抗原免疫动物可提高免疫效果。
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