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简介:微量热泳动(MST)是指分子在微观的温度梯度场中的定向运动。生物分子结构/构象变化会引起其水化层、分子量、电荷的变化,而这种变化会导致分子在温度梯度场中运动速度的改变,这种速度的改变可以用来分析分子间的相互作用以及各种化学计量学参
简介:微量热泳动(MST)是指分子在微观的温度梯度场中的定向运动。生物分子结构/构象变化会引起其水化层、分子量、电荷的变化,而这种变化会导致分子在温度梯度场中运动速度的改变,这种速度的改变可以用来分析分子间的相互作用以及各种化学计量学参数。MST 可以直接在接近天然的环境、任意生物溶液中溶液中测量分子间相互作用,而不需要一个固定的表面,每次实验只需要6ul的样品量,使用低费用的毛细吸管来完成实验,能够在短短十分钟之内测量16个样品的数据,这些特点使得其成为一种最新的、方便、快速、高通量的分子间相互作用的分析仪器。而且,该技术极其灵敏,甚至可以检测到像蛋白质磷酸化或离子结合到蛋白质和DNA/RNA的微小的变化。 通过毛细吸管中心的红外激发和外围的冷却,毛细吸管中产生精确地微观区域的温度梯度差异,将所需要测量的溶液(缓冲液、血清、细胞裂解液和其它生物液体)填充到毛细吸管之中,然后通过监测分子的荧光信号的移动进而监测分子在温度梯度场中的运动。这个荧光信号可以使分子自发的荧光(如蛋白中的色氨酸)或者标记到蛋白上的荧光染料或者融合表达的荧光蛋白(如GFP)。任何一级、二级、三级和/或四级结构的变化所导致的水化层的改变都会影响分子的热泳动效应,可以准确而灵敏测量分子间的相互作用以及分子结构的变化,其灵敏度也是其他技术无法比拟的。
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