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简介:对于ELISA实验中常见问题及解决方法 收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本,储存在 4 ℃ 备用,如有特殊 原因需要周期收集标本, 将标本及时分装后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 条件下保存。避免反复冻融。
简介:对于ELISA实验中常见问题及解决方法 收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本,储存在 4 ℃ 备用,如有特殊 原因需要周期收集标本, 将标本及时分装后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 条件下保存。避免反复冻融。标本 2 -8 ℃ 可保存 48 小时, -20 ℃ 可保存 1 个月。 -70 度可保存 6 个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。 1、 液体类标本: 标本必须为液体,不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。 1ml 的 全血可得到 0.5ml 的血清 或血浆。每个标本量收集体积= 100ul × 检测种类。取材前须向销售人员索要说明书。 2、 血清: 室温血液自然凝固 10-20 分钟后,离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。 ◇ 血浆: 应根据试剂盒的要求选择 EDTA 、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,加入 10 %( v/v )抗凝剂 ( 0.1M 柠檬酸钠或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20 分钟后,离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。如有沉淀形 成,应再次离心。 ◇ 尿液、胸腹水、脑脊液: 用无菌管收集。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。 ◇ 细胞培养上清: 检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。检测细胞内的 成份时,用 PBS ( PH7.2 -7.4 )稀 释细胞悬液,细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。 ◇ 组织标本: 切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS ,缓冲液中可加入 1 μ g/L 蛋白酶抑制剂或 50U/ml 的 Aprotinin ( 抑肽酶)。用手工或匀浆 器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存,如有必要,可以将样品浓缩干燥。 分装后一份待检测,其余冷冻备用。 上海蓝基生物科技有限公司 网 址:www.bluegene.cc 联系方式:021-65423863 65423776 联 系 人:15921525315 QQ:982625975 e-mail: elisakit@sohu.com
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