合集
标准
方法
手册
讲义
报价单
谱图库
色谱图
质谱图
光谱图
X-射线图
波谱图
显微图
更多
专利
样本
相关软件
用户通讯
招标文件
新冠肺炎
其他
标准查询
今日免费资料
论文索引
您还有
0
次抽奖机会
锤子
您现在的位置:
首页
>
资料中心
>
下载
>
蛋白质的顺序分析 下载
蛋白质的顺序分析
扫码解锁,免费下载文件
请使用
最新版本仪器信息网APP
扫码登录
步骤:
打开仪器信息网APP并登录 ——》点击APP首页右上角扫一扫 ——》APP端确认解锁 ——》PC端下载文件
免费注册
简介:蛋白质顺序分析即是指测定蛋白质多肽链的氨基酸排列顺序,又称蛋白质的一级结构分析。 测定方法一般需要以下的技术和步骤:蛋白质的纯化,测定分子量,分析辅基或配基,氨基酸定量组成分析,末端分析,拆开二硫键,肽的裂解、纯化及顺序测定,寻找
简介:蛋白质顺序分析即是指测定蛋白质多肽链的氨基酸排列顺序,又称蛋白质的一级结构分析。 测定方法一般需要以下的技术和步骤:蛋白质的纯化,测定分子量,分析辅基或配基,氨基酸定量组成分析,末端分析,拆开二硫键,肽的裂解、纯化及顺序测定,寻找接头肽以连接成完整的肽链,再经过二硫键定位,最后列出完整蛋白质的顺序。 蛋白质的纯化 待测定顺序的蛋白质样品,需要较高的纯度。须通过多种方法鉴定,如末端分析、电泳、等电聚焦、氨基酸定量组成分析等都证明是均一的蛋白质,杂质含量在5%以下,才适于做顺序分析。 测定分子量 一般用凝胶过滤法,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法。从两种数据,还可知道样品蛋白质是否有亚基结构。 辅基和配基分析 简单蛋白质不含辅基和配基。但结合蛋白质含糖、核酸、脂质或其他有机化合物,这些物质会干扰顺序分析,需采用特殊方法除去。 氨基酸定量组成分析 用氨基酸自动分析仪能准确测定蛋白质样品中各种氨基酸的含量,特别是某些氨基酸,如甲硫氨酸、色氨酸、精氨酸和赖氨酸等的含量对设计顺序测定方案很重要。 末端分析 多肽链的一端为NH2,称为N端,另一端为COOH,称为C端。N端测定用FDNB (2,4-二硝基氟苯),DNS-Cl (1-二甲基萘胺-5-磺酰氯)和DABITC(4-NN□二甲基- 胺重氮苯-4^-异硫氰酸酯) 等化学试剂测定。也可用氨肽酶法。C 端用肼解法或羧肽酶法测定。有的蛋白质的N末端被其他化学基团,如乙酰基,或环化谷氨酸所封闭,就不能用上述方法测定。通过末端分析也能了解蛋白质由几条肽链组成和样品的纯度。 拆开二硫键 肽链中的半胱氨酸残基,常以二硫键的方式与肽链中的其他部位半胱氨酸残基连接,测定顺序时须先拆开二硫键,使肽链呈松散的直链,便于降解和裂解。拆开方法是用巯基试剂还原羧甲基化,或用过甲酸氧化等。 肽的裂解和纯化 先将蛋白质裂解成较大的肽段,以减少纯化和顺序测定的工作量。在一般蛋白质分子中,甲硫氨酸、色氨酸和精氨酸等含量较少,可用专一性高的试剂或酶针对这类氨基酸的肽键裂解,如用溴化氰,氢溴酸和胰蛋白酶等,能得到预期的结果。肽的纯化,一般用离子交换层析,凝胶过滤,电泳和纸层析等方法。70年代以来采用高效液相层析仪,其分辨率高,速度快,是纯化肽的最好工具。 肽的顺序测定 ①埃德曼降解法。用化学试剂──异硫氰酸苯酯,能依次从N端逐个把氨基酸残基降解下来。每一步反应得到一个氨基酸衍生物。经多次重复的反应就得到更多的降解产物,分别鉴定后,即可列出肽链的氨基酸顺序。根据这个原理设计的自动顺序仪,一昼夜连续运转,可测出10多个顺序。但由于化学反应率的限制,不可能无限制地降解到底,因为即使在最好的条件下,每步反应率到98%,一般只能测到50 步左右,这时留下的可供反应的N端愈来愈少,杂质愈来愈多,难以继续测定。所以通常需先把肽链裂解成肽段后再测其顺序。 ②酶法测顺序。用氨肽酶能从N端依次降解,用羧肽酶能从C端依次降解。酶解释放氨基酸是个动力学过程,需在不同时间取样定量测定,根据释放的过程列出顺序,由于酶解过程难以控制,此法得到的数据,一般仅为几个氨基酸顺序。 接头肽 在完成许多肽段的顺序测定后,需要寻找接头肽以把各肽段连接起来而完成蛋白质的全部顺序。其连接法如图核糖核酸酶的全部氨基酸顺序所示。用一个字母表示一个氨基酸残基: 第1种切法 ABCDEFG HIKLMNOP QRSTVWXYZ 第2种切法 FGHIK OPQRS 完整的肽链 ABCDEFGHIKLMNOPQRSTVWXYZ 二硫键定位 用专一性低的蛋白水解酶,如胃蛋白酶、嗜热菌蛋白酶等水解完整的蛋白质成为小的肽段,经分离纯化,找寻含二硫键的肽段。亚硝基铁氰化钠是二硫键的特殊显色剂。测定这些肽段的氨基酸组成和顺序,即可确定肽链内部二硫键的位置,得到完整的蛋白质的氨基酸顺序。 上面介绍的经典的蛋白质顺序测定法,是非常繁琐而工作量浩大的工作。50年代初测定含51个氨基酸残基的胰岛素花了8年时间,现在用自动化仪器和先进检测工具,只需花一周时间。1978年发表的β-半乳糖苷酶,含1021个氨基酸残基,可以说是经典法测定的顶峰。目前新的快速方法是从核酸(DNA)顺序推测蛋白质顺序,已经广泛采用,因在短期内可测数千个核苷酸顺序,从DNA的三联密码能准确推测出蛋白质的氨基酸顺序。这一方法近年来已经有取代上述经典方法的趋势,但是尽管如此,某些环节还须蛋白质顺序测定的经典法配合。
详细>
所需积分:
10 分
所需积分:
10 分
0分
下载次数:0 次
获取积分:页面上方
资料大小: 0 KB
上传人:
admin
上传日期:2002-04-18
收藏资料
(0)
评论
(
0
)
举报
扫码免费下载
立即下载
200份精品资料,免费下载
千种礼品,积分兑换
扫码免费下载
热门资料
GBT 7251.4-2017 低压成套开关设备和控制设备 第4部分:对建筑工地用成套设备(ACS)的特殊要求.pdf
GB5009.229-2016食品酸值标准
使用EXCEL分析数据与图表展示.pdf
GJB∕Z 25-1991 电子设备和设施的接地、搭接和屏蔽设计指南
质谱原理分析
微孔过滤技术
GB / T 50353 记住面积计算标准
YYT 1504-2016 外科植入物 金属接骨螺钉轴向拔出力试验方法
HG 30010-2013 生产区域动火作业安全规范.pdf
JGJ T 136-2017贯入法检测砌筑砂浆抗压强度技术规程.pdf
最新资料
GB 44171-2024 船舶制造重大件吊装作业安全管理要求.pdf
《供厦食品 食用菌》征求意见稿.pdf
知识产权保护中心服务规范(征求意见稿).pdf
早春保护地茄子栽培技术规范(征求意见稿).pdf
玉米套作冬绿肥作物生产技术规程(征求意见稿).pdf
GB 44170-2024 船舶制造防汛防台安全管理要求.pdf
市域(郊)铁路工程施工质量验收标准(征求意见稿).pdf
设施葡萄园间作绿肥技术规程(征求意见稿).pdf
建设项目用地控制指标(征求意见稿).pdf
建设项目用地策划技术规范(征求意见稿).pdf
相关资料
蛋白质分析技术
蛋白质组分析
蛋白质的分析鉴定方法
水蚤的蛋白质组学分析
蛋白质定量分析的进展
蛋白质质谱分析
蛋白质分析中的质谱技术
应用 Primacs SN总氮 蛋白质分析仪测定食品中的蛋白质
CNAL C 2002.01A1-2005 蛋白质—胶内蛋白质的肽质量指纹谱分析
应用PrimacsSN总氮_蛋白质分析仪测定食品中的蛋白质
最新方案
食品/农产品
环保
制药/生物制药
其他
更多解决方案>>
兽药中含量测试检测方案(液相色谱仪)
应用领域:
水中全氟化合物检测方案(固相萃取仪)
应用领域:
水中全氟化合物检测方案(固相萃取仪)
应用领域:
API 和凝胶胶囊中重金属检测方案(微波消解仪)
应用领域:
相关评论
您的评论:
推荐
发表评论
还可以输入
500
字
品牌合作伙伴
上传资料
一键询价
下载该资料的还下载
更多
>>
推荐会议
第五届环境新污染物分析检测网络会议
第十届热分析及联用技术网络会议
AI自动化移液技术揭开蛋白质组学研究新篇章
第三届粮油食品质量安全及品质检测新技术网络会议
更多
>>
推荐课程
系统化设计:有机质谱谱图解析课程设计详述
¥0
质谱不神秘导学课
¥0
GC-MS数据处理
¥19.9
热重分析技术与应用体系课
¥169
上传者上传的其他资料
GBT 44139.2-2024 睡袋的要求 第2部分:原材料性能.pdf
YY0861—XXXX 眼科光学 眼用粘弹剂(征求意见稿)
945 Professional Detector Vario 用户手册
瑞士万通IC Professional Detector手册
电导率仪 使用说明书
Agilent 3200C Conductivity Meter 电导率仪用户手册
下载排行
本周
本月
全部
1
农村饮用水安全工程——水质监测解
2
气相色谱仪维修手册(故障分析)【P
3
安捷伦GC7890超详细资料
4
计量认证人员职责分配
5
中华人民共和国依法管理的计量器
6
GB/T 2406-2009 氧指数测定方法
7
原子吸收中的干扰及其抑制
1
农村饮用水安全工程——水质监测解
2
气相色谱仪维修手册(故障分析)【P
3
安捷伦GC7890超详细资料
4
计量认证人员职责分配
5
中华人民共和国依法管理的计量器
6
原子吸收中的干扰及其抑制
7
GB/T 2406-2009 氧指数测定方法
1
Q2XXX系列DSC产品介绍
2
研究论文集(理论篇)--论文六:用
3
微波催化有机化学反应机理研究
4
研究论文集(理论篇)--论文七:论
5
LC2000性能测试报告
6
Q系列TMA热机械分析仪 产品介绍
7
epMotion 5075如何出色地完成96
8
环境监测分析实验室的质量管理特
9
物理化学专业工具软件做物化实验
请输入验证码
请输入图中
蓝色的字
免积分下载
确认
输入错误!
仪器信息网资料中心栏目所发布的一切文档、图谱等资源仅限于学习和研究目的,版权归原属作者所有;不得将上述内容用于商业或者非法用途,否则,一切后果请用户自负。您必须在下载后的24个小时之内,从您的电脑中彻底删除上述内容。如果您喜欢该资源,请支持正版,以便得到更好的正版服务。如有侵犯到您的权益,请联系我们(download@instrument.com.cn)处理,感谢您的合作!
安装App资料免费下
资料微服务您的资料助手