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高效液相色谱仪测定茶叶中黄曲霉毒素B1 下载
高效液相色谱仪测定茶叶中黄曲霉毒素B1
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简介:1.适用范围 本方法适用于出口茶叶中黄曲霉毒素B1含量的检验。 2.原理概要 样品用三氯甲烷提取,提取液经硅胶柱净化,净化后的提取液用三氟乙酸衍生,用配有荧光检测器的高效液相色谱仪测定,外标法定量。 3.主要试剂和仪器 3.1.主要试剂
简介:1.适用范围 本方法适用于出口茶叶中黄曲霉毒素B1含量的检验。 2.原理概要 样品用三氯甲烷提取,提取液经硅胶柱净化,净化后的提取液用三氟乙酸衍生,用配有荧光检测器的高效液相色谱仪测定,外标法定量。 3.主要试剂和仪器 3.1.主要试剂 三氯甲烷; 正己烷; 苯; 甲醇:紫外光谱级; 乙腈:紫外光谱级; 三氟乙酸; 乙腈-水溶液(1+1); 三氯甲烷-甲醇溶液(95+5); 苯-乙腈溶液(98+2); 黄曲霉毒素B1标准品:纯度≥99%; 黄曲霉毒素B1标准溶液:准确称取适量的黄曲霉毒素B1标准品,以苯-乙腈溶液于棕色容量瓶中,配成浓度为10μg/mL标准贮备液。根据需要,再配成适当浓度的标准工作溶液。 3.2.仪器 高效液相色谱仪,配有荧光检测器; 天津恒奥硅胶小柱; 天津恒奥振荡器:HMS系列; 天津恒奥超声波:HU、HS系列; 天津恒奥氮吹仪; 天津恒奥滤膜:有机系用,0.45μm; 天津恒奥微孔滤膜过滤器 旋转蒸发器; 微量注射器; 离心管:5mL具塞磨口; 粉碎机。 4.试样的抽取与制备 4.1.抽样方法 从整批产品堆垛的上下不同部位随机抽取2.2规定的件数,逐件开启。分别倒出全部茶叶于塑料布上,用取样铲从每件中各取出有代表性的样品约500g。将所取样品充分混匀,用四分法或分样器逐步缩分出500g,装入洁净密封的样品筒内,加封后,标明标记,及时送实验室。 4.2.试样制备 将所取回样品全部磨碎,通过20目筛,混匀,均分成两份试样,装入洁净容器内,密封,标明标记。 4.3.试样保存 将试样于室温下保存。 注:在抽样和制样的操作过程中,必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 5.过程简述 5.1.提取 称取试样5.0g(精确到0.1g)置于100mL具塞锥形烧瓶中,加入15mL三氯甲烷,于振荡器上提取30min,然后经垫有玻璃纤维的漏斗过滤。收集滤液于旋转蒸发器的具尾管圆底烧瓶内,并用三氯甲烷洗涤滤渣,收集滤液至约20mL。 5.2.净化 用旋转蒸发器将上述滤液在50℃水浴中浓缩至约1mL,经0.45μm滤膜过滤后,注入硅胶小柱中。用2~4mL正己烷洗涤烧瓶后淋洗小柱,弃去流出液。然后用3~4mL三氯甲烷-甲醇溶液以每秒钟2滴的流速洗脱,收集洗脱液于离心管中。用氮气仪缓缓吹干,供衍生用。 5.3.衍生 5.3.1.试样 加200μL正己烷和50μL三氟乙酸于上述离心管中,盖紧磨口塞,超声振荡1min,静置10min,用氮吹仪缓缓至干。用乙腈-水溶液(1+1)定容至1.0mL,超声1min,用0.5μm滤膜过滤,滤液供液相色谱用。 5.3.2.标准工作溶液 取1.0mL标准工作溶液,用氮吹仪缓缓吹干,按5.3.1步骤操作。 5.4.测定 5.4.1.色谱条件 色谱柱:NOVA PAKc18,300mm×3.9mm(内径); 流动相:甲醇-水溶液(42+58); 流速:0.8mL/min; 荧光检测器:激发波长375 nm,发射波长425 nm; 色谱柱温度:室温。 5.4.2.测定 根据样液中黄曲霉毒素B1的含量情况,选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中黄曲霉毒素B1衍生物的响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液的衍生物溶液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下,黄曲霉毒素B1衍生物保留时间约为8min。 5.4.3.空白试验 除不加试样外,按上述测定步骤进行。 6.结果计算 用色谱数据处理机进行数据处理 7.低限和回收率测定 7.1.低限 本方法的测定低限为0.001mg/kg。 7.2.回收率 回收率的实验数据:黄曲霉毒素B1的添加浓度在0.001~0.5mg/kg范围内,回收率为89.1%~104.9%。 由上表可以看出:使用天津恒奥设备处理样品,可以得到预期的结果。
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