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液相色谱柱保留时间不重现应考虑的方面
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简介:保留时间不重现可能由多种因素引起,通常还会影响到峰面积的重现性,建议检查以下几个方面: 1.确认流动相是新鲜配制的,比例没有错误。比如一些挥发性的溶液,如乙酸,最好及时更换。 2.确认色谱条件在色谱柱使用范围之内,如pH 范围、温度、压
简介:保留时间不重现可能由多种因素引起,通常还会影响到峰面积的重现性,建议检查以下几个方面: 1.确认流动相是新鲜配制的,比例没有错误。比如一些挥发性的溶液,如乙酸,最好及时更换。 2.确认色谱条件在色谱柱使用范围之内,如pH 范围、温度、压力。 3.仔细观察柱前压的变化,如果压力稳定,就可以判断泵的系统没有问题;如果是压力不稳定,一定会影响保留时间,这种状况通常是由于泵头里有气泡造成的。请将流动相仔细脱气,并排出泵内气泡。 4.观察色谱峰形、柱效变化情况,确认色谱柱是否被污染,如果确定色谱柱污染,可尝试使用适当溶剂冲洗。 5.如果使用梯度洗脱方法,请确认平衡时间足够长。流动相中使用离子对试剂(烷基磺酸钠等)或固定相为正相硅胶等,往往需要更长的平衡时间。 6.确认样品是否过载,减少进样量(进原进样量的10%确认)。 7.组分在色谱柱中保留不够。调整色谱条件,使样品在柱上适当保留。
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