HPLC简介-2.高效液相色谱法的特点

分析对简介：

分析对象（应用）
在气相色谱一章，我们知道，气相色谱适合于分离分析那些在实验柱温下, 具有足够的挥发度, 且热稳定的物质，分子量一般不超过400。随着气相色谱技术的发展，特别是高温固定相研制，气相色谱的分析对象范围正在逐步扩大。但是对于那些没有足够的挥发度, 且热不稳定的物质，特别是一些生物样品分离分析，气相色谱则无能为力，这样的物质可能适合于液相色谱的分离分析。换句话说，只要用合适的溶剂溶解的物质，无论哪种都可成为液相色谱的分析对象。
 流动相
众所周知，流动相物态形式决定气相色谱和液相色谱的形式。但是气相色谱的载气流动相是通常是永久气体, 它仅起运载样品的作用，一般对分离结果好坏的没有影响。而液相色谱液体流动相不仅起运载样品的作用，同时对样品组分有一定的亲和力(排阻色谱除外), 它会与固定相展开对组分的剧烈竞争, 因而对分离起很大作用。换句话说，调整流动相的组成是改善液相色谱分离的另一个重要条件。  操作条件选择
1） 柱温：LC一般在室温下操作
2） LC的线速度比气相色谱约慢(2~3)个数量级, 虽然LC的纵向扩散可以忽略, 但“柱外效应”的重要性更为突出。
3） 液体的粘度比气体大100倍, 密度大约大1000倍。LC需采用高柱前压。
4） 气体可以压缩，GC的理论处理应采用压力校正因子等进行。
5） 液体具有表面张力, 而气体没有, 这就成了TLC和PC展开的一个动力。
6） LC中样品回收比较容易, 可用于规模制备。
决定气相色谱分离好坏的主要操作条件固定相（色谱柱）和柱温；而决定液相色谱分离好坏的主要操作条件固定相（色谱柱）和流动相组成。

高效液相色谱和经典液相色谱的主要差别在于分离效率高低和是否分离分析一体化。具体来说，两者固定相性质、形状及粒度，输液设备和检测手段等方面有较大的差异。
 填料的差异经典液相色谱的填料颗粒粗（粒径大于100 μm）、形状不规则、粒度范围宽，因而存在分离效率差的缺陷。
HPLC采用具有颗粒细、粒度范围窄、能承受高压，从而达到传质阻力小, 分离效率高的（3~10）μm的高效固定相（色谱填料）。
 流动相的推动力
经典液相色谱一般是依靠重力让溶剂流下，分离速度慢，分析时间长。而HPLC采用高压泵输送流动相，可准确控制流速，分析速度快。
 检测方式经典液相色谱主要用于混合物的分离，一般分离和检测过程独自。而HPLC 将柱分离技术与光学检测器联用，使得液相色谱由最初的以分离目的为主，发展为可以同时完成分离分析目的的一类重要的仪器分析方法。
此外，经典液相色谱柱一次使用。而高效液相色谱柱可以反复使用。总之，高效液相色谱与经典液相色谱相比, 使用时更方便, 对操作者的依赖性更小。高效液相色谱的高重现性和连续的定量检测导致了定性和定量分析结果具有较高的准确性和精密度。

采用高效色谱柱、高压输液设备和高灵敏度检测器, 从而实现了高效、高速和高灵敏度、定量准确, 达到可与气相色谱相媲美的分离分析性能

摘自“现代仪器分析网络课程”，作者：厦门大学-阮源萍