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简介:7.2 高效液相色谱测定 7.2.1 流动相 溶剂A:酸性水溶液(165ml乙酸溶于1000ml水中) 溶剂B:乙腈 7.2.2 梯度洗脱 时间 溶剂A% 溶剂B% 梯度曲线 0 30 70 线性 20.0 5 95 线性 30.0 0 100 线性 42.0 0 100 流速:0.7ml/min 基线稳定
简介:7.2 高效液相色谱测定 7.2.1 流动相 溶剂A:酸性水溶液(165ml乙酸溶于1000ml水中) 溶剂B:乙腈 7.2.2 梯度洗脱 时间 溶剂A% 溶剂B% 梯度曲线 0 30 70 线性 20.0 5 95 线性 30.0 0 100 线性 42.0 0 100 流速:0.7ml/min 基线稳定后开始进样 两次进样间隙时间为10分钟 7.2.3 进样量:10μl 7.2.4检测波长 在300nm到600nm波长范围进行扫描,确定三个测定波长(432nm,478nm和520nm) 7.2.5 标准曲线 用5个标准工作溶液的测定值绘制标准曲线,各种色素的标准曲线分别在最大吸收波长处由5点回归计算(苏丹橙B在432nm波长有最大吸收,苏丹红1号, 苏丹红2号和胭脂树橙在478nm波长有最大吸收和苏丹红3号,苏丹红4号和苏丹红B在520nm波长有最大吸收)。 将7.1制好的样过0.45μm的膜装入自动进样器的小瓶后进行液相色谱测定得到结果。 标准回归曲线经过每次实验配制的系列标准溶液测定结果的验证。 7.3 计算 着色剂含量按以下公式计算: R=C×V×D/M 单位:mg/kg C-样品中待测组分的浓度,单位:μg/ml M-检测样品取样量(g) V-样品溶液体积(ml) D-样品溶液的稀释倍数 8 苏丹红1号 8.1 第一步是确定方法的操作条件 应用Norm NF V03 110 获得以下操作条件: 标准曲线模型是线性的 478nm下的检测限是0.013μg/ml 478nm下定量的最低浓度为:0.106μg/ml 在辣椒粉样品中的添加回收率高于90% 对于其它食品基质中的色素方法也进行了研究并可应用类似方法对所有着色剂进行检测。 8.2 应用LC/MS确证苏丹红1号 对于复杂食品基质本底或一种新的基质本底,确证苏丹红1号分子的存在是非常必要的。 如果光谱分析结果不令人满意(如待分析物浓度较低或可能存在结构类似物时)也可以应用这种技术进行确证。 8.3 设备 8.3.1 液相色谱与电喷雾离子化质谱仪联用 8.3.2 色谱柱:PHENOMENEX LUNA C18 3μm 150×2nm 8.3.3 柱温箱温度调至30℃ 8.4 HPLC测定 8.4.1 流动相 溶剂A:20%酸性水溶液(0.1%乙酸溶液) 溶剂B:80%乙腈 流速:0.2ml/min 8.4.2 进样量:10μl 8.4.3 检测器 正电喷雾 设定条件: 喷雾电压:5300V 喷雾口电压:120V 周边电压:9.50V 辅助气体温度:300℃ 8.4.4 测定 步骤7.12取得的提取物先稀释10倍后再稀释100倍后经0.45μ膜过滤于自动进样瓶中. 8.5 结果 样品中苏丹红1号组分与样准品出峰时间基本一致相对误差为5%,并经质谱检测由m/Z为249和1022的离子定性
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