可放大的DNA与RNAi分离,良好的产品回收率
研究基因静默或用于基因敲除时,需要高纯度寡核苷酸。XBridge OSTC18色谱柱,具有极高分辨率,其柱规格设计用于满足实验室规模的分离需求,是纯化去三苯甲基(脱保护)寡核苷酸的首选色谱柱。如下表所示,XBridge OST C18色谱柱规格和操作流速的选择,主要取决于合成反应混合物的规模大小。我们建议根据寡核苷酸样品的载量选择适当的色谱柱规格,这样可使组分分辨率最大化。
柱规格 | 大概样品载量** | mg*** | 流速 |
2.1 x 50 mm | 0.04 μmoles | 0.2 mg | 0.2 mL/min |
4.6 x 50 mm | 0.20 μmoles | 1.0 mg | 1.0 mL/min |
10 x 50 mm | 1.00 μmoles | 4.5 mg | 4.5 mL/min |
19 x 50 mm* | 4.00 μmoles | 16.0 mg | 16.0 mL/min |
30 x 50 mm* | 9.00 μmoles | 40.0 mg | 40.0 mL/min |
50 x 50 mm* | 25.00 μmoles | 110.0 mg | 110.0 mL/min |
* OST订制柱
** 所列数值仅为约值,且取决于寡核苷酸的长度、碱基组成、以及所采用的“切取中心”的馏
分收集方法。
*** 按平均寡核苷酸分子量及合成产率估算
将siRNA Duplex与其相关杂质分离开
LC System: Waters Alliance HPLC
Column: XBridge OST BEH C18, 4.6 x 50 mm, 2.5 μm
Part Number: 186003953
Column Temp.: 20 °C
Flow Rate: 1.0 mL/min
Mobile Phase A: 0.1 M triethylammonium acetate, pH 7.0
Mobile Phase B: 20% acetonitrile in A
Gradient: 25–75% B in 30.0 min
Detection: PDA, UV @ 260 nm