为了活细胞成像实验过程中保持细胞的存活,涉及到维持数项物理参数的控制。
温度:
有了Solent Scientfic全包围孵化腔温度被维持在环绕细胞培养皿的三轴内。这确保了温度平衡通过显微镜框架和组件台没有低温点和高温梯度。
这里我们有一个12小时实验中4000个独立温度测量值。
正如你所见,温度被控制在±0.2℃
湿度:
湿度不是像温度那样控制的。没有必要说这个实验的相对湿度要控制在72.8%,另一个要控制在88.6%。我们需要的是,介质正上方大气一样尽可能保持饱和。这样最小程度的蒸发可以使实验过程中介质成分的浓度保持完整。
二氧化碳:
为了介质的pH值在顶部空间成像过程中保持恒定,大约要保持介质5%的二氧化碳浓度。与其尝试、保持整个腔室内部环境5%二氧化碳的同时,在小的内部腔室中有热空气循环。或者头架是用过的。
当考虑到湿度控制时,如此使用小头架也是有帮助的。如果整个大腔室内部环境充满水蒸气,那么显微镜的环境将缺乏抵抗力。
顶部环境的控制时通过流入湿润的5%二氧化碳的速率刚好快于泄漏维持的一个轻微的正压力。典型的流动速率需要达到几毫升每分钟。
一个简单的空气中的5%二氧化碳源是一个包含了预先在空气中混合好5%二氧化碳的气柱。这种混合气体可以从很多国家的供应商那里买到。
一个简答的气流控制需要的都在这里了。
一些实验室有由室内100%二氧化碳稀释提供实验需要,这是另外的配置。Solent Scientific提供一种可以按要求几毫升每分钟速率释放混合气体,相比于市面上能买到的很多工作范围在1升每分钟的的气体混合器