辣木叶中氮（蛋白质）含量检测方案(电热消解仪)

      上海沛欧定氮仪和消化炉检测辣木叶提取物中的蛋白质含量      摘要：采用凯氏法测辣木叶提取物中的蛋白质含量是国标推荐方法。 关键词：沛欧全自动定氮仪、消化炉、辣木叶蛋白质含量 引言：辣木叶为辣木科辣木属植物的树叶，可食用，其营养价值非常丰富，含有大量的蛋白质、氨基酸、纤维素及矿物质，具有降血糖、降脂、降压、抗肿瘤、抗氧化、通便、利尿、改善睡眠等功效，长期食用可增强人体免疫功能，延缓衰老、预防疾病，其蛋白质的含量直接影响辣木叶的品质和营养功效，因此对辣木叶提取物蛋白质含量的测定具有重要的意义。为此我们使用沛欧全自动定氮仪SKD-1000（采用通用的颜色法判断、具有多项技术）红外石英消化炉SKD-20S2对辣木叶提取物进行蛋白质检测。 前言:按GB2009.5-2016食品安全国家标准 《食品中蛋白质的测定》要求测试。  参考文献：GB2009.5-2016 一、原理辣木叶提取物样品在浓硫酸和硫酸铜、硫酸钾高温下，把有机的细胞结构破坏，把氮元素氧化成硫酸铵，（为了使得样品消化时不产生挂壁，必须采用样品孔间温差小和带程序升温功能的消化炉，否则会产生挂壁现象，导致消化失败）消化完成后，需要将样品冷却到40℃左右，再把消化管放入定氮仪上。消化管内自动添加稀释液、碱，反应杯内自动添加硼酸和显色剂。对消化管内样品加热逸出氨气和水蒸气混合液，冷却流到反应杯内，同时用标准盐酸进行滴定，直到蒸馏结束和滴定到终点。计量消耗标准盐酸的体积即可计算辣木叶提取物中蛋白质含量。二、仪器和设备1. 全自动定氮仪SKD-1000（上海沛欧分析仪器有限公司）2. 消化炉SKD-20S2（上海沛欧分析仪器有限公司）3. 万分之一天平4. 滴管移液器5.烘箱三、试剂、样品和标准品1. 标准盐酸浓度：0.1114 mol/L2. 40%的氢氧化钠3. 2%的硼酸+甲基红和嗅甲酚绿混合的显色剂（1:3.5）4. 催化剂（硫酸铜:硫酸钾为1:10的混合物）5. 蒸馏水6. 样品：辣木叶提取物202010017. 硫酸铵  四、操作条件和程序1. 样品制备用分析天平依次称取2个空白，称样量为：①0.4082 g硫酸铜、3.6037 g硫酸钾；②0.4045 g硫酸铜、3.6049 g硫酸钾，5个辣木叶提取物待测样品，称样量为：①0.4061 g硫酸铜、3.6010 g硫酸钾、0.4058 g辣木叶提取物；②0.4048 g硫酸铜、3.6035 g硫酸钾、0.4037 g辣木叶提取物；③0.4097 g硫酸铜、3.6060 g硫酸钾、0.4032 g辣木叶提取物；④0.4069 g硫酸铜、3.6018 g硫酸钾、0.4096 g辣木叶提取物；⑤0.4047 g硫酸铜、3.6009 g硫酸钾、0.4011 g辣木叶提取物，将称量好的空白与样品分别置于标号的消化管中，依次向每个消化管中加入10 mL硫酸。2. 样品消化及消化炉参数设置将制备好的空白及样品按序号放入消化炉，盖上排废气装置，打开抽气泵上水龙头开关（前三个阶段水流要大，使释放出大量废气能及时排除，第四阶段水流开小以避免酸雾排出），然后进行消化炉温度-时间曲线参数设置：135度（20分钟）--190度（25分钟）---350度（5分钟）----400度（70分钟），消化炉根据时间-温度曲线自动升温和保温，直到消化结束。把消化架取下放在冷却架上，冷却到40 ℃左右。3.凯氏定氮仪仪器回收率测定用分析天平精密称量已烘干的硫酸铵（125 ℃烘箱烘2h）2份，称样量为：0.1041 g、0.115 g，分别置于标号的消化管中，然后在凯氏定氮仪仪器上进行测定参数设置进行测定，参数设置为：碱10 mL、稀释液20 mL、样品0.1041g和0.115g、滴定酸为盐酸、标准酸浓度为0.1114 mol/L、定时6 min、系数1、名称硫酸铵1和硫酸铵2，参数设置完毕后，点击屏幕上的测试程序中的调取，点击样品测试选项即可进行测试，测试完毕后查看两次平行测定的含氮和消耗酸的数据是否正常，依次来判定该仪器运行是否正常。4.凯氏定氮仪参数设置  打开凯氏定氮仪显示屏，点击参数设置，依次输入碱45 mL、稀释液40mL、样品克数、标准酸浓度0.11414 mol/L、定时6 min、样品名称、系数6.25，总共测5个样品，因此要依次设置5次，一并保存，即可自动测定。5.样品蛋白质测定  参数设置完后，便可将对应标号的空白和样品的消化管接到仪器对应位置，先测空白，再依次测样，测定数据依次自动保存在仪器硬件盘中，测完查询记录即可。6.计算公式蛋白质含量计算公式x%=6.38×1.401(v-v0)c/m氮含量计算公式y%=1.401(v-v0)c/mx%---------蛋白质含量y%---------氮含量v--------消耗标准酸体积（ml)V0------空白消化标准酸体积(ml)C--------标准酸浓度（mol/L)m--------样品质量(ｇ)质控品采用烘干的分析纯（99%）硫酸氨，硫酸铵理论含氮量21.21%辣木叶1 辣木叶2  辣木叶3  辣木叶4  辣木叶5  硫酸氨1  硫酸氨2 消耗标准酸（ml)3.7953.773.6563.6963.62014.17415.109蛋白质含量(%)9.12259.12628.84508.80188.8037----------------------含氮量(%)-------------------------------------------------------------------21.250321.1487空白消耗标准酸体积（ul)551551551551551247247 结果分析:本次测试数据符合要求，数据可靠。 附：5009.5-2016《食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定》 ‍注意事项：辣木叶提取物在取样时注意均匀性，在消化样品时，尤其是含糖、油脂的样品容易起泡产生样品挂壁，这时消化炉要有程序升温功能，孔间温差要小，避免样品温差所产生的升温不协调而使样品挂壁。定氮仪要有足够大的蒸馏功率，以便尽可能蒸馏出氨气，提升回收率。如果全自动定氮仪则采用颜色法终点判断的方法，保障数据准确性和仪器的线性度。