党参、枸杞及当归中30种禁用农药及残留物检测方案(液质联用仪)

SSL-CA19-254Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-440 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.-Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cn Tel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn LC-MS/MS 法测定中药材党参中30种禁用农药及残留物 LCMSMS-440 摘要：本文利用岛津 LCMS-8045三重四极杆液质联用仪建立了 LC-MS/MS 测定2020版 《中国药典》通则2341第五法《药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法》规定的30种禁用农药及残留物方法。在1.0~100.0ug/L浓度范围内建立标准曲线，线性关系良好，相关系数r均大于0.999。精密度实验中，30种禁用农药及残留物的保留时间和峰面积的相对准偏差在 0.02%-0.2%和0.94%-4.90%之间。在0.05 mg/kg 加标浓度下，30种禁用农药及残留物回收率分布在65.0%~96.0%之间。 关键词：：三重四极杆液相色谱质谱联用仪 中药材 农药残留 2019年8月16日，国家药典委员会官方网站发布涉及中药材及饮片中禁用农药、重金属及二氧化硫等残留量的《0212药材和饮片检定通则》公示稿，与2015版《中国药典》相比，0212通则最显著的变化是加入了药材及饮片(植物类)共53种禁用农药及残留物的定量限，规定了禁用农药及残留物不得检出(不得过定量限)。2019年8月27日，国家药典委员会官方网站发布《中国药典》2020年版四部通则2341《农药残留量测定法》第五法《药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法》公示稿。 本文采用岛津 LCMS-8045 三重四极杆液相色谱质谱联用仪，参照《2341农药残留量测定法》征求意见稿中第五法的仪器参数、色谱条件及30种农药及残留物的推荐离子对，依照第五法的样品前处理方式，建立了中药材中30种禁用农药及残留物测定的方法。该方法灵敏度高，重复性好，满足2020版《中国药典》对药材及饮片(植物类)中30种禁用农药及残留物限量值的要求。 实验部分 1.1化合物信息 本实验使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A与三重四极杆质谱仪 LCMS-8045联用系统。具体配置为 LC-30AD(输液泵)×2， DGU-20A5(在线脱气机)， SIL-30AC(自动进样器)， CTO-20AC(柱温箱))，CBM-20A(系统控制器)， LCMS-8045三重四极杆质谱仪， LabSolutions Ver 5.97， LabSolutions Insight Ver 3.6(色谱工作站) 1.2分析条件 液相色谱条件 色谱柱： Shim-pack Velox C18， 2.1 mm 1.D.×100 mm L.， 2.7 um )(Shimadzu SGLC，P/N：227-32009-03 流动相：A相-0.1%甲酸水溶液(含5mmol/L甲酸铵) B相-乙腈-0.1%甲酸水溶液(含5mmol/L甲酸铵) (95：5，，v/v) 流速：0.30 mL/min 柱温：40℃ 洗脱方式：采用梯度洗脱，B相初始浓度为25%，时间程序见表1。 表1梯度洗脱时间程序 时间(min) 单元 Command Value 1.00 泵 B. Conc 25 12.00 泵 B. Conc 70 14.00 泵 B. Conc 70 14.10 泵 B. Conc 25 16.00 控制器 Stop 质谱条件 离子化模式 ： ESI，正离子模式分析加热模块温度：400℃离子源接口电压：4.5kV接口温度：300℃雾化气 ：氮气 3.0 L/min干燥气：氮气10.0 L/min加热气 ：干燥空气10.0 L/minMRM 参数：见表2 DL 温度 ：250°C 表2MMRM 参数 No. 中文名 英文名 保留时间 (min) 监测离子对 Q1 Pre (V) CE Q3 Pre (V) 1 0.724 142.05>94.00 -16.0 -15.0 -15.0 甲胺磷 Methamidophos 142.05>125.05 -16.0 -16.0 -11.0 2 0.746 207.10>89.00 -14.0 -14.0 -15.0 涕灭威亚砜 Aldicarb-sulfoxide 207.10>132.00 -14.0 -8.0 -23.0 196.90>46.10 -13.0 -20.0 -17.0 3 杀虫脒 Chlordimeform 1.053 196.90>117.05 -13.0 -27.0 -21.0 196.90>89.00 -21.0 -49.0 -17.0 240.10>223.00 -26.0 -8.0 -23.0 4 涕灭威砜 Aldicarb-sulfone 0.913 240.10>86.00 -26.0 -21.0 -15.0 5 久效磷 Monocrotophos 0.839 223.90>193.00 -11.0 -10.0 -21.0 223.90>127.00 -11.0 -15.0 -24.0 238.10>181.10 -15.0 -16.0 -17.0 6 3-羟基克百威 Carbofuran-3-hydroxy 1.376 238.10>163.10 -15.0 -10.0 -17.0 238.10>220.10 -15.0 -8.0 -19.0 7 硫环磷 Phosfolan 2.068 256.00>168.10 -15.0 -25.0 -15.0 256.00>140.10 -15.0 -25.0 -15.0 8 涕灭威 Aldicarb 2.756 208.00>116.10 -14.0 -9.0 -19.0 208.00>89.10 -15.0 -20.0 -18.0 9 磷胺 Phosphamidon 2.949 299.90>127.00 -15.0 -13.0 -19.0 299.90>174.05 -15.0 -25.0 -25.0 382.10>199.10 -19.0 -15.0 -26.0 10 甲磺隆 Metsulfuron-methyl 4.050 382.10>167.10 -19.0 -16.0 -18.0 382.10>167.10 -19.0 -15.0 -26.0 332.05>273.00 -12.0 -15.0 -24.0 26 甲基异柳磷 Isofenphos-methyl 10.970 332.05>121.15 -10.0 -33.0 -22.0 332.05>231.00 -12.0 -15.0 -24.0 27 10.936 363.00>307.10 -18.0 -18.0 -21.0 蝇毒磷 Coumaphos 363.00>227.00 -18.0 -26.0 -23.0 10.992 247.10>137.10 -26.0 -10.0 -14.0 28 地虫硫磷 Fonofos 247.10>109.00 -27.0 -19.0 -19.0 29 甲拌磷 Phorate 11.347 260.85>47.10 -10.0 -32.0 -20.0 260.85>75.10 -10.0 -10.0 -15.0 30 硫线磷 Cadusafos 10.601 271.10>97.00 -30.0 -37.0 -18.0 271.10>159.00 -30.0 -14.0 -29.0 271.10>131.00 -30.0 -37.0 -18.0 表格中多对监测离子对供定量和定性分析选择使用。 1.3混合对照品溶液的制备 精密量取禁用农药混合对照品溶液1mL， 置20mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，即得。 1.4供试品溶液的配制 党参：参照2020版《中国药典》四部通则征求意见稿“：“2341农药残留量测定法第五法”4.1直接提取法，取供试品粉末(过三号筛)5g，精密称定，加氯化钠lg，立即摇散，再加入乙腈50mL匀浆处理2分钟(每分钟12000转)，离心(每分钟4000转)，分取上清液，沉淀再加乙腈50mL，匀浆处理1分钟，离心，合并并两次提取的上清液，氮吹浓缩至约3~5mL，放冷，用乙腈稀释至10.0 mL，摇匀。上机时，精密量取1mL供试品溶液，精密加入水0.3mL， 混匀，滤过，取续滤液。取2uL注入液相相色谱串联质谱仪，记录峰面积。 枸杞、当归前处理方法同党参。 1.5空白基质溶液的制备 取空白基质样品，同1.4供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。上机时，精密量取1mL空白基质溶液，精密加入水0.3mL，混匀，滤过，取续滤液。取2uL注入液相相色谱串联质谱仪，记录峰面积。 结果与讨论 2.1党参基质混合对照品溶液色谱图 图1党参空白基质混合对照品溶液 TIC图(以甲胺磷计浓度为 25.0 ng/mL) 2.2标准曲线 分别精密量取1.5中制备得到的党参空白基质溶液1.0mL，置氮吹仪上，40℃水浴浓缩至约 0.6 mL，分别加入不同体积的混合对照品溶液配制成标准曲线浓度(以甲胺磷计)为1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、25.0、50.0、100.0 ng/mL， 加乙腈稀释至1mL，精密加入水0.3mL， 混匀，滤过，取续滤液。取2 uL注入液相相色谱串联质谱仪测定，记录峰面积，绘制标准曲线，结果见表3。 表3标准曲线结果 2.3精密度考察 取2.2中的混合对照品溶液，按照1.2分析条件连续进样测定6次，计算目标化合物的保留时间和峰面积相对标准偏差(RSD%)。具体结果见表4，，目标化合物的保留时间和峰面积的相对准偏差在 0.02%-0.2%和0.94%-4.90%之间，结果表明该仪器具有良好精密度。 表4精密度考察结未果(n=6) 2.4加标回收考察 取党参供试品，精密加入混合对照品溶液(加标量以甲胺磷计为 0.05 mg/kg)，按1.4供试品溶液的制备进行样品前处理，回收率测定结果见表5。结果表明，30种农药及残留物平均回收率在65.0-96.0%之间，符合《2341农药残留量测定法》征求意见稿要求。 表5回收率考察结果(n=4) 2.5实际样品测定 2.5.1党参实际样品测试 从市面上购得党参作为实际党参样品，按1.4供试品溶液的制备进行样品前处理，按照1.2分析条件进样分析。结果表明，F公司党参供试品中检出甲拌磷亚砜 0.022 mg/kg， MRM 图谱见下图2。 图2党参供试品中甲拌磷亚磷 MRM 图谱 图3枸杞供试品中克百威 MRM 图谱 2.5.2枸杞实际样品测试 参考上述前处理方案，选取枸杞空白基质，制备基质匹配曲线，外标法定量分析枸杞样品。结果表明，F公司枸杞供试品中检出克百威 0.0007 mg/kg， MRM 图谱见上图3. 2.5.3当归实际样品测试 参考上述前处理方案，选取当归空白基质，制备基质匹配曲线，外标法定量分析了不同品牌的当归供试品，MRM 图谱见图4，结果如下表6。 P公司当归供试品 MRM 图 X公司当归供共品 MRM图 图44家企业当归供试品 MRM图 表6不同品牌的当归供试品测定结果 品牌 检出量 (mg/kg) 甲拌磷亚砜 甲拌磷砜 特丁硫磷亚砜 特丁硫磷砜 甲拌磷 F公司 0.154 0.062 N.D. N.D. 0.279 P公司 0.068 0.192 0.061 0.014 0.003 T公司 0.016 0.008 N.D. N.D. 0.003 X公司 0.112 0.175 N.D. N.D. 0.007 结论 本文参考2020版《中国药典》通则2341第五法《药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法》，利用 LCMS-8045三重四极杆液质联用仪建立了30种禁用农药及残留物方法。该方法在1.0~100.0 ug/L浓度范围内线性关系良好，相关系数r均大于0.999。精密度实验中，30种禁用农药及残留物的保留时间和峰面积的相对准偏差在0.02%-0.2%和 0.94%-4.90%之间，仪器精密度良好。30种禁用农药及残留物在0.05mg/kg加标浓度下，回收率在65.0%~96.0%之间，该方法的加标回收率结果良好。并对党参、枸杞以及当归的实际样品进行测试。 使用岛津 LCMS-8045 三重四极杆液质联用测定中药材中30种禁用农药及残留物，结果显示出仪器灵敏度高，重复性和回收率良好等优势。该系统适用于中药材及饮片的农药及残留物分析。 岛津应用云 本文利用岛津LCMS-8045三重四极杆液质联用仪建立了LC-MS/MS测定党参、枸杞及当归30种禁用农药及残留物方法。党参在1.0~100.0 µg/L浓度范围内建立标准曲线，线性关系良好，相关系数r均大于0.999。精密度实验中，30种禁用农药及残留物的保留时间和峰面积的相对准偏差在0.02%-0.2%和0.94%-4.90%之间。在0.05 mg/kg加标浓度下，30种禁用农药及残留物回收率分布在65.0 %~96.0 %之间。本方法操作简单，可有效地检测中药材中禁用农药及残留物的含量，完全能够满足2020年版《中国药典》禁用农药检测的要求。