采用ASE顺序提取法提取陈皮中的橙皮苷,相比较
提取总量的1.4%。 2010版药典推荐方法-索氏提取,能够达到了除脂和萃取
有效成分的目的,并简化了操作步骤及节省了大量的操
作时间。ASE提取中药中的活性成分时,既能达到药典推
荐萃取方法等同的萃取率,在提高萃取条件时,ASE还能
达到更高的萃取率。同时具有操作简单、快速、高效等
特点,值得在中药领域推广使用。
2 加速溶剂萃取-顺序萃取法萃取陈皮中的橙皮苷 车金水叶明立梁立娜 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 关键词:加速溶剂萃取;顺序提取;中药;陈皮;橙皮苷; Key words: Accelerated Solvent Extraction; Sequential Extraction;Traditional Chinese Medicine; Citri Reticulatae Pericarpium; Hesperidin 引言 中药陈皮中的橙皮苷具有抗氧化性,防止自由基的形成,能够作为功能性因子加入到食品中。参照2010版药典,对橙皮苷的提取需先采用石油醚索氏提取陈皮中的挥发油类成分,然后再进行橙皮苷的提取,该前处理方法需要消耗大量的时间和溶剂。赛默飞生产的加速溶剂萃取仪(ASE),很好地解决了上述问题,具有简单、快速、溶剂消耗小、萃取效率高及环境污染小等优点。采用ASE提取,建立序列(sequence)的方式,分别用石油醚和甲醇顺序提取,能够在半个小时左右的时间内处理好样品,大大的节省了前处理时间及溶剂消耗。 ASE条件 仪器: ASE350 前处理方法:陈皮样品粉碎至30目左右,过30目筛。取陈皮2g,精密称定,加入石英砂适量,混合均匀,转至底层垫有纤维素膜的萃取池(10mL)中,加速溶剂萃取,弃去石油醚提取液,甲醇提取液过0.45pm滤膜,即得。 表1 ASE萃取条件 ASE条件 Step1 Step2 溶剂 石油醚 甲醇 温度 120℃ 120℃ 加热时间 6min 6min 静态萃取时间 3min 5min 循环次数 2 1-2 吹扫体积 60% 60% 吹扫时间 200s 90s 总体积 40mL 总时间 30min 仪器: UltiMate 3000高效液相色谱仪,配四元梯度泵、自动进样器、柱温箱、紫外检测器。 分析柱: Acclaim C18, 120A, 4.6mm, 250mmx5um(PN:059149) 流动相:甲醇-醋酸-水(35:4:61) 流速:1.0mL/min 柱温:30℃ 检测器: UV@283nm 进样量:10pL 结果与讨论 图1标准品色谱图 图2样品色谱图 溶剂的选择 本实验参考2010版药典方法,分别采用石油醚及甲醇作为ASE萃取溶剂。其中石油醚作为第一步萃取溶剂,除去样品中的挥发油类等脂溶性物质;第二步采用甲醇作为橙皮苷的提取溶剂,将样品中的目标成分萃取出来。 本实验分别考察了80℃、100℃、120℃和140℃作为萃取温度对陈皮中的橙皮苷萃取率的影响。随着萃取温度的提高, ASE对橙皮苷的萃取率随着升高,于120℃时达到最佳的萃取效率,对橙皮苷的萃取效率为6.7%。再升高萃取温度,对橙皮苷的萃取效率没有影响,维持在同一水平。故本文采用120℃作为后续萃取温度。 ASE炉体升温速度较快,而降温速度较慢,为提高效率,避免使用不同的萃取温度对同一样品进行萃取。故对橙皮除脂萃取温度也采用120℃。 图3萃取温度的选择 静态萃取时间及循环次数 本方法考察了ASE除脂过程中循环次数的影响(静态萃取时间为3min),当第二次萃取循环时提取液几乎为无色,故采用3min静态萃取时间,2次循环次数作为除脂过程的提取条件。 为研究静态萃取时间及循环次数对橙皮苷萃取效率的影响,本方法采用固定静态萃取时间(5min)的方法,考察不同循环次数中对橙皮苷的萃取量。实验结果表明,第一次萃取循环对橙皮苷的提取量占3次提取总量的81.5%;第二次萃取循环对橙皮苷的提取量占3次提取总量的17.1%;第三次萃取循环对橙皮苷的提取量占3次提取总量的1.4%。 图4不同萃取循环对橙皮苷的提取效率的影响 2010版药典方法:取陈皮样品2g,精密称定,置索氏提取器中,加石油醚80mL,加热回流3h,弃去石油醚,药渣挥干,加甲醇80mL,再加热回流至提取液无色(约3-4h),放冷,滤过,滤液置100mL容量瓶中,定容,摇匀,即得。 当采用1次萃取循环作为循环次数时,ASE对陈皮中的橙皮苷的平均萃取率为5.1%, RSD为3.8%(n=3)。同时采用2010版药典规定方法对同一样品进行萃取(方法见1.1部分),索氏提取的平均提取率为5.2%,RSD为7.4%(n=3)。实验结果表明:ASE对陈皮中的橙皮苷的萃取率和药典推荐方法-索氏提取萃取率相当,但ASE更加省时,省溶剂,平行性更好。 表2ASE和索氏提取比较(ASE采用1次萃取循环) 萃取方法 样品量 溶剂量 耗时 萃取率 RSD ASE 2g 55mL 35min 5.1% 3.8% SE 2g 200mL 7h 5.2% 7.4% ASE采用2次萃取循环作为萃取循环次数时, ASE对陈皮中的橙皮苷的平均萃取率为6.3%, RSD为3.1%(n=3)。ASE的提取率较传统的索氏提取提高了约20%,且稳定性更好。同时比较溶剂消耗量,耗时, ASE具有速度快、溶剂消耗小等优点。 表3ASE和索氏提取比较(ASE采用2次萃取循环) 萃取方法 样品量 溶剂量 耗时 萃取率 RSD ASE 2g 55mL 35min 6.3% 3.1% SE 2g 200mL 7h 5.2% 7.4% 结论 采用ASE顺序提取法提取陈皮中的橙皮苷,相比较2010版药典推荐方法-索氏提取,能够达到了除脂和萃取有效成分的目的,并简化了操作步骤及节省了大量的操作时间。ASE提取中药中的活性成分时,既能达到药典推荐萃取方法等同的萃取率,在提高萃取条件时, ASE还能达到更高的萃取率。同时具有操作简单、快速、高效等特点,值得在中药领域推广使用。 ( [1]国家药典委员会.中国人民共和国药典2010版 第一部[M].北京:中国医药科技出版社,2010: 176. ) thermoscientific.com ( C 2012 T h e rmo Fishe r Scie n tific Inc . Al l ri g hts reserved. All trademarks are the pro p erty of Thermo Fisher Scientific Inc. a nd its s ubsidiaries. Specifications, terms a nd p r icin g are subject to change. Not all products are available in all countries. Please consult your l ocal s ales r epresentative for d e tails. ) 北京 免费服务热线: 上海浦东新金桥路27号6号楼 北京东城区安定门东大街28号 8008105118 邮编:201206 雍和大厦西楼F座7层702-715室 4006505118 电话:021-68654588 邮编:100007 传真:021-64457830 电话:010-84193588 传真:010-88370548 ThermoFisherSCIENTIFIC Thermo Fisher Scientific,San Jose, CA USA is ISO Certified.上海SCIENTIFIC 采用ASE顺序提取法提取陈皮中的橙皮苷,相比较 提取总量的1.4%。 2010版药典推荐方法-索氏提取,能够达到了除脂和萃取 有效成分的目的,并简化了操作步骤及节省了大量的操 作时间。ASE提取中药中的活性成分时,既能达到药典推 荐萃取方法等同的萃取率,在提高萃取条件时,ASE还能 达到更高的萃取率。同时具有操作简单、快速、高效等 特点,值得在中药领域推广使用。
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赛默飞色谱与质谱为您提供《陈皮中橙皮苷检测方案(快速溶剂萃取)》,该方案主要用于中药材和饮片中含量测定检测,参考标准--,《陈皮中橙皮苷检测方案(快速溶剂萃取)》用到的仪器有赛默飞Dionex™ ASE™ 350快速溶剂萃取仪、赛默飞UltiMate 3000 基础自动系统液相色谱