肉类、鱼虾类中兽药检测方案(液质联用仪)

LAAN-A-LM-C010 ApplicationnNo.C99News http：//www.shimadzu.com.cn用户服务热线电话： 800-810-0439第一版发行日：2015年1月 ApplicationNews LC/MSLiquid Chromatography Mass Spectrometry 使用三重四极杆 LC/MS/MS 筛选分析兽药 No.C99 Quantitative Analysis of Veterinary Drugs Using the Shimadzu LCMS-8050 Triple Quadrupole Mass Spectrometer 日本于2006年5月开始实施了日本肯定列表制度。该制度规定，禁止销售农药、饲料添加物和兽药超过最大残留限量标准的食品。目前根据本制度，对许多兽药也规定了严格的残留标准。由于该制度涉及的残留化合物很多，而且预计今后数量还会不断增加，因此需要对此类化合物进行快速高灵敏度分析。 |样品预处理 Sample Preparation 在兽药分析中，通常对肉、鱼等含大量脂质的样品进行测定。为得到高灵敏度和重复性的分析结果，预处理操作显得非常重要。使用固相萃取法，不仅费时还费力，因此本次测定为了简化预处理步骤，采用了测定蔬菜中残留农药使用的 QuEChERS 法进行了预处理。QuEChERS 法包括乙腈提取与净化两道工序，本次测定只进行了乙腈提取。 *QuEChERS 盐套件： Restek Q-sepTM AOAC 2007.01 通过同时注入样品与水来改善峰形 Improved Peak Shape Using Sample /Water Co-Injection 在反相模式中，样品与流动相的洗脱可能导致极性化合物峰变形或者峰分裂。因此，当样品为富有机溶剂相时，需要添加水来进行置换或稀释，以降低洗脱。在本次分析中，预处理结束时的样品为100%乙腈，直接将其注入 LC/MS 后，在部分成分中发生了峰分裂(图2左)。 为了尽量减少预处理操作，本次测定中使用自动进样器(SIL-30A)的预处理功能，同时注入样品与水，从而改善了峰形。 本文向您介绍对含农产品和海产品粗提取物89种成分的兽药同时进行高灵敏度分析的示例。 (1)使用食品加工机将100g样品(鸡、猪、三文鱼、虾)搅匀 家 (2)称量10g已搅匀的样品，并移至50mL管中 (3)添加5mL水，用手轻摇 家 (4)添加含1%乙酸的乙腈与QuEChERS盐*，用手轻摇(1 min.) (5)离心分离(3 min.) 家 (6)提取乙腈层，用过滤器过滤 (7)LC/MS/MS分析 图1 预处理步骤 Sample Preparation Procedure 基质标准溶液的 MRM 测定 MRM Analysis of Matrix Standards 图3为向样品中添加标准溶液得到的基质标准溶液 MRM色谱图(下述数据使用猪肉提取液)。表1为不含基质的标准溶液与基质添加标准溶液的定量下限。由此可知，只进行乙腈提取的粗提取物也得到了与标准溶液相同的灵敏度。虽然在标准溶液与基 质添加溶液中也确认到部分定量下限不同的化合物，但是这是由于杂质离子导致背景上升(参考图5)造成的，而非基质效应造成。 图3兽药中89种成分的峰检测示例(10ug/L标准溶液添加猪肉提取液) MRM Chromatograms of 89 Veterinary Drugs (10 pg/L pork extract solution with added standard solution) 表1标准溶液及基质标准溶液的定量下限与基质标准曲线线性范围 LOQs of Veterinary Drugs in Neat Standards and Matrix Standards and Calibration Range of Veterinary Drugs in Matrix Standards 标准溶液 基质添加标准溶液 标准溶液 基质添加标准溶液 图4代表性化合物LOQ 附近的 MRM 色谱图与标准曲线 MRM Chromatograms in the Vicinity of the LOQ and Calibration Curves of Typical Compounds l 农产品和海产品粗提取物的回收率(基质效应的确认) and Fishery Products (Matrix Effect Verification) 我们对测定含有大量基质的样品时有无基质效应进行了确认。使用虾、鸡肉、猪肉、三文鱼等4种肉类作为样品，并向各样品的乙腈萃取溶液添加标准溶液，使浓度达到 10 ug/L 后计算回收率。 由下图可知，9成以上的化合物得到70~120%的良好回收率，并且，测定 QuEChERS 法中仅提取乙腈的粗提取液，也可知其不受基质效应的影响。 通过 QuEChERS 法提取乙腈 Acetonitrile Extraction Efficiency Using QuEChERS Method 为确认QuEChERS 法的乙腈提取效率，在图1的步骤(2)中，将标准溶液的浓度定容到 10 ug/L 后计算回收率。由表2可知，在有基质和无基质的情况下，约8成的化合物均得到了良好的回收 率。但是，高极性四环素和喹诺酮类化合物的回收率低，说明这些化合物需要使用其他提取液和提取试剂。 表2加样回收率(标准溶液前添加)Recoveries (Pre-Spike) 回收率 无基质 有基质(猪肉) 回收率低的化合物 <50% 17(19%) 13 (15%) Tetracyclines 50%-70% 1(1%) 8(9%) Quinolones >70% 71(80%) 68(76%) l持久稳定性 Robustness 使用猪肉粗提取液(添加10ug/L标准溶液)，确认了仪器的 在非常复杂的基质连续测定中，连续3天获得了稳定的数据。长期稳定性。 图6连续测定中代表性化合物的峰面积和重复性 Area Plot and %RSD of Typical Compounds with Continuous Analysis 表3分析条件 ( 岛津企业管理(中国)有限公司岛津(香港)有限公司 ) ( 400-650-0439 ) ( 免声明： ) ( *本资料未经许可不得擅自修改、转载、销售； ) ( *本资料中的所有信息仅供参考，不予任何保证。 ) ( 如有变动，恕不另行通知。 ) 本文介绍对含农产品和海产品粗提取物89种成分的兽药同时进行高灵敏度分析。采用参考QuEChERS方法进行样品预处理，9成以上组份回收率70-120%。具有良好稳定性。