小牛血清中小牛血清成份检测方案(液质联用仪)

SSL-CA14-685Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-339 上海市徐汇区宜州路180号华鑫天地二期C801栋 咨询电话：021-34193996http：//www.shimadzu.com.cn 细胞培养基上清液方法包在小牛血清成份分析方面的应用 LCMSMS-339 摘要：本文使用细胞培养基上清液分析方法包对不同批次的小牛血清成份进行了分析。利用方法包中的条件对小牛血清中的101种成份进行了分析，对用户提供的5份小牛血清样品按照方法包中的前处理方法进行前处理后，并且按方法包中的分析条件进行测定，包含内标在内共有54种组分被检出。该方法可以对不同批次的小牛血清进行成份分析，从而对商品化的小牛血清的质量监控提供可靠的参考依据。 关键词：三重四极杆质谱细胞培养基上清液分析方法包小牛血清 人工合成的培养基通常会加入动物血清，加入动物 物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清血清是为了给体外培养的细胞提供一个类似生物体内的 中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长环境，此外动物血清中也包含了一些动物的激素和酶， 因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑可以促进细胞的发育。血清是由血浆去除纤维蛋白而形 制生长活性是达到生理平衡的。通过该方法包可以对不成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知， 同批次的小牛血清中的组分进行量化的监控，为培养基但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动 产品的质量提供了有效的监控手段。 实验部分 1.1仪器 本实验使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A 与三重四极杆质谱仪LCMS-8060 联用系统。具体配置为LC-30ADx2输液泵， DGU-20A，在线脱气机， SIL-30ACMP 自动进样器， CTO-30A柱温箱， CBM-20A 系统控制器，LCMS-8060三重四极杆质谱仪，LabSolutions Ver. 5.80 色谱工作站。 1.2分析条件 液相条件 色谱柱：见细胞培养基上清液分析方法包离子化模式： ESI(+/-)流动相：见细胞培养基上清液分析方法包加热气：空气10.0L/min流速：0.35 mL/min雾化气：氮气3.0L/min柱温：40℃干燥气：氮气10.0L/min进样量：1pL接口温度：300℃洗脱方式：见细胞培养基上清液分析方法包DL 温度：250℃加热模块温度：400℃扫描模式：多反应监测(MRM) 质谱条件 监控的化合物信息：见表1 表1细胞培养方法包中102种化合物列表 编号 化合物名 类别 编号 化合物名 类别 编号 化合物名 类别 2-Isopropylmalic acid 内标 3 Ornithine 氨基酸 Deoxycytidine 核苷酸 2 Gluconic acid 糖类 Oxidized glutathione 氨基酸 Guanine 核苷酸 3 Glucosamine 糖类 37 Phenylalanine 氨基酸 71 Guanosine 核苷酸 4 Hexose (Glucose) 糖类 38 Pipecolic acid 氨基酸 72 Guanosine monophosphate 核苷酸 5 Sucrose Carbohydrate 糖类 39 Proline 氨基酸 73 Hypoxanthine 核苷酸 6 Threonic acid 糖类 40 Serine 氨基酸 74 Inosine 核苷酸 / 2-Aminoadipic acid 氨基酸 41 Threonine 氨基酸 75 Thymidine 核苷酸 8 4-Aminobutyric acid 氨基酸 42 Tryptophan 氨基酸 76 Thymine 核苷酸 9 4-Hydroxyproline 氨基酸 43 Tyrosine 氨基酸 77 Uracil 核苷酸 10 5-Glutamylcysteine 氨基酸 44 Valine 氨基酸 78 Uric acid 核苷酸 11 5-Oxoproline 氨基酸 45 homocysteine 氨基酸 79 Uridine 核苷酸 12 Alanine 氨基酸 46 L-Homoserine 氨基酸 80 Xanthine 核苷酸 13 Alanyl-glutamine 氨基酸 47 4-Aminobenzoic acid 维生素 81 Xanthosine 核苷酸 14 Arginine 氨基酸 48 Ascorbic acid 维生素 82 Penicillin G 抗生素 15 Asparagine 氨基酸 49 Ascorbic acid 维生素 83 2-Aminoethanol 其他 2-phosphate 16 Aspartic acid 氨基酸 50 Biotin 维生素 84 2-Ketoisovaleric acid 其他 17 Citrulline 氨基酸 51 Choline 维生素 85 3-Methyl-2-oxovaleric acid 其他 18 Cystathionine 氨基酸 52 Cyanocobalamin 维生素 86 4-Hydroxyphenyllactic acid 其他 19 Cysteine 氨基酸 53 Ergocalciferol 维生素 87 Citric acid 其他 20 Cystine 氨基酸 54 Folic acid 维生素 88 Ethylenediamine 其他 21 Glutamic acid 氨基酸 55 Folinic acid 维生素 89 Fumaric acid 其他 22 Glutamine 氨基酸 56 Lipoic acid 维生素 90 Glyceric acid 其他 23 Glutathione 氨基酸 57 Niacinamide 维生素 91 Histamine 其他 24 Glycine 氨基酸 58 Nicotinic acid 维生素 92 Isocitric acid 其他 25 Glycyl-glutamine 氨基酸 59 Pantothenic acid 维生素 93 Lactic acid 其他 26 Histidine 氨基酸 60 Pyridoxal 维生素 94 Malic acid 其他 27 Isoleucine 氨基酸 61 Pyridoxine 维生素 O-Phosphoethanolamine 其他 28 Kynurenine 氨基酸 62 Riboflavin 维生素 Putrescine 其他 1.3样品前处理方法 取100 pL 小牛血清至离心管中加入20 pL内标溶液，加入200 uL乙腈，充分振匀室温15000 rpm， 15 min 离心。取100 uL上清加入900 uL 超纯水充分振匀后直接上样分析。 结果与讨论 2.1部分组份 MRM 色谱图 使用该方法包对 S-1、S-2、S-3、S-4、S-5五个批次的小牛血清进行了分析，经分析，连同内标在内共有54种组份被检出，包含氮源、碳源、代谢产物以及微量元素等成份在内的部分检出的化合物的色谱图如下： 图11部分检出化合物色谱图 2.2不同批次小牛血清化合物对比图 对5个不同批次的小牛血清成份进行分析后，部分化合物的柱状对比图如下所示；由对比图可知不同批次的化合物在氨基酸，葡萄糖，代谢产物以及微量元素方面存在较大的差异。 图2部分检出化合物柱状对比图 结论 本文利用细胞培养基上清液分析方法包及超高效液相色谱三重四极杆质谱联用仪 LCMS-8060 对商品化的5个不同批次的小牛血清进行了组份分析。使用该方法包共检出包含内标在内的54种组份，针对这些组分做了5个批次的柱状对比图，对比结果显示这五个不同批次的小牛血清在葡萄糖，氨基酸及微量元素等方面存在较大差异。该方法为相关从业人员提供种了一种非常好的质量监控手段。 田岛津全球应用技术开发支持中心 利用细胞培养基上清液分析方法包及超高效液相色谱三重四极杆质谱联用仪LCMS-8060对商品化的5个不同批次的小牛血清进行了组份分析。使用该方法包共检出包含内标在内的54种组份，针对这些组分做了5个批次的柱状对比图，对比结果显示这五个不同批次的小牛血清在葡萄糖，氨基酸及微量元素等方面存在较大差异。