药材中氧化氯丹检测方案(液相色谱柱)

上海宸乔生物科技有限公司Shanghai Chenqiao Biosciences CO.， LTDwww.keyanwang.com.cn 2341农药残留量测定法 本方法系用气相色谱法(通则0521)和质谱法(通则0431)测定药材、饮片及制剂中部分农药残留量。除另有规定外，按下列方法测定。 第一法有机氯类农药残留量测定法-色谱法 1.9种有机氯类农药残留量测定法 色谱条件与系统适用性试验以(14%-氰丙基-苯基)甲基聚硅氧烷或(5%苯基)甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛毛管柱(30mx0.32mmx0.25um)，63Ni-ECD 电子捕获检测器。进样口温度230℃，检测器温度300℃，不分流进样。程序升温：初始100℃，每分钟10℃升至220℃，每分钟8℃升至250℃，保持10分钟。理论板数按a-BHC 峰计算应不低于1×106，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。 对照品贮备溶液的制备 精密称取六六六(BHC)(a-BHC，B-BHC，Y-BHC，8-BHC)、滴滴涕(DDT)(p，p'-DDE，p，p'-DDD，o，p'-DDT，p，p'-DDT)及五氯硝基苯 (PCNB)农药对照品适量，用石油醚(60?90℃)分别制成每1ml约含4~5ug的溶液，即得。 混合对照品贮备溶液的制备精密量取上述各对照品贮备液0.5ml， 置10ml量瓶中，用石油醚(60?90℃)稀释至刻度，摇匀，即得。 混合对照品溶液的制备精密量取上述混合对照品贮备液，用石油醚(60?90℃)制成伟1L分别含 Opg、1pg、5pg、 10pg、50pg、100pg、250pg的溶液，即得。 供试品溶液的制备药材或饮片取供取品，粉碎成粉末(过三号筛)，取约2g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加水20ml浸泡过夜，精密加丙酮40ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用丙酮补足减失的重量，再加氯化钠约6g， 精密加二氯甲烷30ml， 称定重量，超声15分钟，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，静置(使分层)，将有机相迅速移入装有适量无水硫酸钠的 100ml具塞锥形瓶中，放置4小时。精密量取35ml， 于40℃水浴上减压浓缩至近干，加少量石油醚(60?90℃)如前反复操作至二氯甲烷及丙酮除净，用石油醚(60?90℃)溶解并转移至10ml具塞刻度离心管中，加石油醚(60?90℃)精密稀释至5ml，小心加入硫酸1ml，振摇1分钟，离心(3000 转/分钟)10分钟，精密量取上清液2ml， 置具刻度的浓缩瓶(见图)中，连接旋转蒸发器，40℃下(或用氮气)将溶液浓缩至适量，精密稀释至1ml，即得。 制剂取供试品，研成细粉(蜜丸切碎，液体直接量取)，精密称取适量(相当于药材2g)，以下按上述供试品溶液制备法制备，即得供试品溶液。测定法分别精密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的混合对照品溶液各 1pl，注入气相色谱仪，按外标法计算供试品中9种有机氯农药残留量。 图 刻度浓缩瓶 2.22种有机氯类农药残留量测定法 色谱条件及系统适用性试验分析：以50%苯基50%二甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱(30mx0.25mmx0.25pm)，验证柱： 以100%二甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱(30mx0.25mmx0.25pm)， 63Ni-ECD 电子捕获检测器。进样口温度240℃，检测器温度300℃，不分流进样，流速为恒压模式(初始流速为1.3ml/min)。程序升温：初始70℃，保持1分钟，每分钟10℃升至180℃，保持5分钟，再以每分钟5℃升至220℃，最后以每分钟100℃升至280℃，保持8分钟。理论板数按a-BHC 计算应不低于1×106，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。 对照品贮备溶液的制备精密称取表1中农药对照品适量，用异辛烷分别制成如表1中浓度，即得。混合对照品贮备溶液的制备精密量取上述对照品贮备溶液各 1ml， 置100ml量瓶中，用异辛烷稀释至刻度，摇匀，即得。 22种有机氯标准溶液GC-ECD谱图 GC色谱条件 色谱柱： WEL-17， 30mx0.25mmx0.25pm柱温： 70℃(1min ) 10℃/min→180℃(5min)5℃/min →220℃(0min)100℃/min→280℃ (8min)载气： N2， 1.3ml/min 进样器：280℃，分流进样 检测器： ECD 300℃ 混合对照品溶液的制备分别精密量取上述混合对照品贮备溶液，用异辛烷制成每1L分别含 10pg、20ug、50pg、100pg、200pg、500pg的溶液，即得(其中β-六六六、异狄氏剂、p，p'-滴滴滴、o，p'-滴滴涕每1L分别含20pg、40pg、100pg、200pg、400pg、1000pg)。 供试品溶液的制备取供试品，粉碎成粉末(过三号筛)，取约1.5g，精密称定，置于50ml聚苯乙烯具塞离心管中，加入水10ml，混匀，放置2小时，精密加入乙腈15ml， 剧烈振摇提取1分钟，再加入预先称好的无水硫酸镁4g 与氯化钠1g的混合粉末，再次剧烈振摇1分钟后，离心(4000转/分钟)1分钟。精密吸取上清液10ml， 40℃减压浓缩至近干，用环己烷-乙酸乙酯(1：1)混合溶液分次转移至10ml量瓶中，加环己烷-乙酸乙酯(1：1)混合溶液至刻度，摇匀，转移至预先加入 1g 无水硫酸钠的离心管中，振摇，放置1小时，离心(必要时滤过)，取上清液5ml过凝胶渗透色谱柱(400mmx25mm，内装 BIO-Beads S-X3填料；以环己烷-乙酸乙酯(1：1)混合溶液为流动相；流速为每分钟5.0ml)净化，收集18?30分钟的洗脱液，于40℃水浴减压浓缩至近干，加少量正己烷替换两次，加正己烷 1ml 使溶解，转移至弗罗里硅土固相萃取小柱[1000mg/6ml， 用正己烷-丙酮(95：5)混合溶液10ml 和正己烷10ml预洗]上，残渣用正己烷洗涤3次，每次1ml，洗液转移至同一弗罗里硅土固相萃取小柱上，再用正己烷-丙酮(95：5)混合溶液10ml洗脱，收集全部洗脱液，置氮吹仪上吹至近干，加异辛烷定容至1ml，涡旋使溶解，，即得。 GPC色谱条件 凝胶柱： Bio-Beads SX-3 400×25mm 流速：5ml/min 流动相：环己烷/乙酸乙酯=1/1 柱温：室温(约24℃) 测定法分别精密吸取供试品溶液和混合对照品溶液各1ul， 注入气相色谱仪，按外标标准曲线法计算供试品中22种有机氯农药残留量。 2015版中国药典22种有机氯类农药残留量测定/2015版中国药典农药残留检测净化所需产品： 1.货号125400 凝胶渗透色谱柱(空柱) 400mm*25mm 2.货号025400 有机氯前处理凝胶色谱柱(成品柱) 400mm*25mm 3.货号1522750 BIO-Beads S-X3填料 200-400目，100g/瓶 4.货号：KB-17 石英毛细管柱30m*0.25mm*0.25um 5.货号172183 氮吹仪 6.货号57057 弗罗里硅土固相萃取小柱1000mg/6ml，30 支/盒 7.货号570123 手动固相萃取装置 8.货号58056 5ml手动进样阀 9.货号SP-756 紫外可见分光光度计 10. 货号LP3010 10ml 高压输液泵 11.货号 S9425p 凝胶色谱系统(GPC) 限度除另有规定外，每1kg中药材或饮片中含总六六六(a-BHC， B-BHC， Y-BHC， ō-BHC之和)不得过0.2mg；总滴滴涕(p，p'-DDE， p，p'-DDD， o，p'-DDT， p，p'-DDT之和)不得过 0.2mg；五氯硝基苯(Quintozene)不得过 0.1mg； 六氯苯(Hexachlorobenzene)不得过 0.1mg；七氯(Heptachlor)、顺式环氧七氯(Heptachlor-exo-epoxide)和反式环氧七氯(Heptachlor-endo-epoxide)之和不得过 0.05mg； 艾氏剂(Aldrin)和狄氏剂(Dieldrin)之和不得过0.05mg；异狄氏剂(Endrin)不得过 0.05mg；顺式氯丹(cis-Chlordane)、反式氯丹(trans-Chlordane)和氧化氯丹 (oxy-Chlordane)之和不得过 0.05mg； a-硫丹(a-Endosulfan)、β-硫丹(β-Endosulfan)和硫丹硫酸盐(Endosulfan sulfate)之和不得过 3mg。 【附注】 (1)当供试品中有农药检出时，可在验证柱中确认检出的结果，再进行定量。必要时，可用气相色谱--质谱法进行确证。 (2)加样回收率应在 70%?120%之间。 表122种有机氯类农药对照品贮备液浓度、相对保留时间及检出限参考值 序号 中文名 英文名 对照品贮备液(pg/ml) 相对保留时间(分析柱) 检出限(mg/kg) 1 六氯苯 Hexachlorobenzene 100 0.574 0.001 2 一六六六 a-BHC 100 0.601 0.004 3 五氯硝基苯 Quintozene 100 0.645 0.007 丫六六六 Y-BHC 100 0.667 0.003 5 β六六六 FBHC 200 0.705 0.008 6 七氯 Heptachlor 100 0.713 0.007 7 8六六六 -BHC 100 0.750 0.003 8 艾氏剂 Aldrin 100 0.760 0.006 9 氧化氯丹 oxy-Chlordane 100 0.816 0.007 10 顺式环氧七氯 Heptachlor-exo-epoxide 100 0.833 0.006 11 反式环氧七氯 Heptachlor-endo-epoxide 100 0.844 0.005 12 反式氯丹 trans-Chlordane 100 0.854 0.005 13 顺式氯丹 cis-Chlordane 100 0.867 0.008 14 a硫丹 a-Endosulfan 100 0.872 0.01 15 p，p-滴滴伊 p.p'-DDE 100 0.892 0.006 16 狄氏剂 Dieldrin 100 0.901 0.005 17 异狄氏剂 Endrin 200 0.932 0.009 18 o，p'-滴滴涕 o.p'-DDT 200 0.938 0.018 19 p，p'-滴滴滴 p，p'-DDD 200 0.944 0.008 20 硫丹 F-Endosulfan 100 0.956 0.003 21 p，p'-滴滴涕 p，p'-DDT 100 0.970 0.005 22 硫丹硫酸盐 Endosulfan sulfate 100 1.000 0.004 注；各对照品的相对保留时间以硫丹硫酸盐为参照峰计算。 第二法有机磷类农药残留量测定法-色谱法 色谱条件与系统适用性试验以50%苯基50%二甲基聚硅氧烷或(5%苯基)甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱(30mx0.25mmx0.25pm)，氨磷检测器(NPD)或火焰光度检测器(FPD)。进样口温度220℃，检测器温度300℃，不分流进样。程序升温：初始120℃，每分钟10℃升至200℃，每分钟5℃升至240℃，保持2分钟，每分钟20℃升至270℃，保持0.5分钟。理论板数按敌敢畏峰计算应不低于6000，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。 对照品贮备溶液的制备精密称取对硫磷、甲基对硫磷、乐果、氧化乐果、甲胺磷、久效磷、二嗪磷、乙硫磷、马拉硫磷、杀扑磷、敌敌畏、乙酰甲胺磷农药对照品适量，用乙酸乙酯分别制成每 1ml约含100pg 的溶液，即得。 混合对照品贮备溶液的制备分别精密量取上述各对照品贮备溶液1ml， 置20ml棕色量瓶中，加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，即得。 混合对照品溶液的制备精密量取上述混合对照品贮备溶液，用乙酸乙酯制成每1ml含0.1pg、0.5pg、1pg、2pg、5pg的浓度系列，即得。 供试品溶液的制备药材或饮片取供试品，粉碎成粉末(过三号筛)，取约5g，精密称定，加无水硫酸钠5g， 加入乙酸乙酯50?100ml，冰浴超声处理3分钟，放置，取上层液滤过，药渣加入乙酸乙酯 30?50ml，冰浴超声处理2分钟，放置，滤过，合并两次滤液，用少量乙酸乙酯洗涤滤纸及残渣，与上述滤液合并。取滤液于40℃以下减压浓缩至近干，用乙酸乙酯转移至 5ml量瓶中，并稀释至刻度；精密吸取上述溶液1ml， 置石墨化炭小柱(250mg/3ml用乙乙乙酯5ml预洗)上，用正己烷-乙酸乙酯(1：1)混合溶液5ml洗脱，收集洗脱液，置氮吹仪上浓缩至近干，加乙酸乙酯定容至1ml， 涡旋使溶解，即得。 测定法分别精密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的混合对照品溶液各1ul，注入气相色谱仪，按外标法计算供试品中12种有机磷农药残留量。 第三法拟除虫菊酯类农药残留量测定法-色谱法 色谱条件与系统适用性试验以(5%苯基)甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱(30mx0.32mmx0.25pm)， 63Ni-ECD 电子捕获检测器。进样口温度270℃，检测器温度330℃。不分流进样(或根据仪器设置最佳的分流比)。程序升温：初始160℃，保持1分钟，每分钟10℃升至278℃，保持0.5分钟，每分钟1℃升至290℃，保持5分钟。理论板数按溴氰菊酯峰计算应不低于105，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。 对照品贮备溶液的制备精密称取氯氰菊酯、氰戊菊酯及溴氰菊酯农药对照品适量，用石油醚(60?90℃)分别制成每1ml约含20?25pg的溶液，即得。 混合对照品贮备溶液的制备精密量取上述各对照品贮备液1ml， 置10ml量瓶中，用石油醚(60?90℃)稀释至刻度，摇匀，即得。 混合对照品溶液的制备精密量取上述混合对照品贮备液，用石油醚(60?90℃)制成每1L分别含 0pg、2pg、8pg、40pg、200pg的溶液，即得。 供试品溶液的制备药材或饮片取供试品，粉碎成粉末(过三号筛)，取约1?2g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加石油醚(60?90℃)-丙酮(4：1)混合溶液30ml， 超声处理15分钟，滤过，药渣再重复上述操作2次后，合并滤液，滤液用适量无水硫酸钠脱水后，于40?45℃减压浓缩至近干，用少量石油醚(60?90℃)反复操作至丙酮除净，残渣用适量石油醚(60?90℃)溶解，置混合小柱[从上至下依次为无水硫酸钠2g、弗罗里硅土4g、微晶纤维素1g、氧化铝 1g、无水硫水钠2g，用石油醚(60?90℃)-乙醚(4：1)混合溶液20ml预洗]上，用石油醚(60?90℃)-乙醚(4∶1)混合溶液90ml洗脱，收集洗脱液，于40?45℃减压浓缩至近干，再用石油醚(60?90℃)3?4ml重复操作至乙醚除净，用石油醚(60?90℃)溶解并转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀， 即得。 测定法分别别密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的混合对照品溶液品 1ul， 注入气相色谱仪，按外外法计算供试品中3种拟除虫菊酯农药残留量。 第四法农药多残留量测定法-质谱法 1.气相色谱-串联质谱法 色谱条件以5%苯基甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱(30mx0.25mmx0.25pm色谱柱)。进样口温度240℃，不分流进样。载气为高纯氦气(He)。进样口为恒压模式，柱前压力为 146kPa。程序升温：初始温度70℃，保持2分钟，先以每分钟25℃升温至150℃，再以每分钟3℃升温至200℃，最后以每分钟8℃升温至280℃，保持10分钟。 质谱条件以三重四极杆串联质谱仪检测；离子源为电子轰击源(EI)，离子源温度230℃。碰撞气为氮气或氩气。质谱传输接口温度280℃。质谱监测模式为多反应监测(MRM)，各化合物参考保留时间、监测离子对、碰撞电压(CE)与检出限参考值见表2。为提高检测灵敏度，可根据保留时间分段监测各农药。 表276种农药及内标对照品、监测离子对、碰撞电压(CE)与检出限参考值 编号 中文名 英文名 保留时间(min) 母离子 子离子 CE(V) 检出限(mg/kg) 1 敌敌畏 Dichloryos 5.9 184.9 109.0 93.0 79.0 10 5 0.005 2 二苯胺 Diphenylamine 10.5 169.0 168.2 15 0.005 169.0 140.0 35 3 四氯硝基苯 Tecnazene (TCNB) 10.2 260.9 203.0 10 0.005 214.9 179.0 10 4 杀虫脒 Chlordimeform 11.2 195.9 181.0 5 0.025 0.005 151.9 117.1 10 5 氟乐灵 Trifluralin 11.6 305.9 264.0 5 264.0 160.1 15 6 六六六 a-BHC 12.1 216.9 181.1 5 0.005 181.1 145.1 15 7 氯硝胺 Dicloran 12.6 206.1 176.0 10 0.005 206.0 148.0 20 续表 www.keyanwang.com.cn 22 七氯 Heptachlor 16.8 273.7 238.9 15 0.005 271.7 236.9 15 23 八氯二丙醚 Octachlorodipropyl ether 17.3 129.9 94.9 20 0.005 (S421) 108.9 83.0 10 24 皮蝇磷 Fenchlorphos 17.4 286.0 271.0 15 0.005 285.0 269.9 15 25 甲基五氯苯硫醚 Methyl-pentachlorophe- 18.0 296.0 281.0 20 0.005 nyl sulfide 296.0 263.0 15 277.0 109.0 15 26 杀螟硫磷 Fenitrothion 18.2 260.0 125.0 10 0.01 27 苯氟磺胺 Dichlofluanid 18.4 223.9 123.0 123.1 77.1 10 20 0.01 28 艾氏剂 Aldrin 18.5 262.9 192.9 35 0.01 254.9 220.0 20 29 代倍硫磷 Fenthion-d6(0，o-dime- 19.0 284.0 169.0 15 thyl-d6) 284.0 115.0 20 30 三氯杀螨醇 Dicofol 19.2 139.0 111.0 15 0.01 251.0 139.0 10 31 毒死蜱 Chlorpyrifos 19.3 313.8 285.8 5 0.005 313.8 257.8 15 续表 宸乔 上海宸乔生物科技有限公司 46 乙基溴硫磷 Bromophos-ethyl 22.6 358.7 302.8 302.8 284.7 15 15 47 顺式氯丹 Chlordane-cis 22.8 271.9 372.9 236.9 265.9 15 20 48 o，p'-滴滴伊 o，p'-DDE 22.5 248.0 246.0 176.2 176.2 30 30 49 o-硫丹 a-Endosulfan 22.6 194.9 276.7 159.0 241.9 5 15 50 氟节胺 Flumetralin 23.3 143.0 143.0 117.0 107.1 20 20 51 狄氏剂 Dieldrin 23.8 277.0 241.0 5 262.9 193.0 35 52 o，p滴滴滴 o，p'-DDD 24.4 237.0 165.2 20 235.0 165.2 20 53 p，p-滴滴伊 p，p'-DDE 24.0 246.1 315.8 176.2 246.0 30 15 0.01 54 异狄氏剂 Endrin 24.7 202.0 262.8 139.1 193.0 20 除草醚 Nitrofen 24.9 282.9 253.0 10 续表 68 氟丙菊酯 Acrinathrin 30.4 207.8 181.1 10 0.005 181.0 152.0 30 69 氯氟氰菊酯 Cyhalothrin 30.4 208.0 197.0 181.0 141.0 5 10 0.005 70 氯菊酯 Permethrin 31.4，31.6 183.1 183.1 168.1 165.1 10 10 0.005 711 氟氯氰菊酯 Cyfluthrin 32.3， 32.4， 163.0 127.0 5 0.025 32.5，32.6 226.0 206.0 12 72 Cypermethrin 32.7，32.9， 181.0 152.0 10 0.025 氯氰菊酯 33.0， 33.1 181.0 127.0 30 73 氟氨戊菊酯 Flucythrinate 33.1， 33.4 198.9 156.9 157.0 107.1 10 15 0.025 74 喹禾灵 Quizalofop-ethyl 33.0 163.0 371.8 136.0 298.9 10 10 0.01 75 氰戊菊酯 Fenvalerate 34.3， 34.7 167.0 125.1 5 0.025 225.0 119.0 18 76 溴氰菊酯 Deltamethrin 36.0 181.0 152.1 25 0.025 252.7 174.0 8 注：1.表中化合物10与29为内标。 2.部分化合物存在异构体，存在多个异构体峰的保留时间。 对照品贮备溶液的制备精密称取表2与表4中农药对照品适量，根据各农药溶解性加乙腈或甲苯分别制成每1ml含1000pg的溶液，即得(可根据具体农药的灵敏度适当调整贮备液配制的浓度)。 内标贮备溶液的制备I取代莠去津和氛代倍硫磷对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每1ml各含1000pg的混合溶液，即得。 混合对照品溶液的制备精密量取上述各对照品贮备液适量，用含0.05%醋酸的乙腈分别制成每1L含100ug和 1000ug的两种溶液，即得。 内标溶液的制备精密量取内标贮备溶液适量，加乙腈制成每 1ml含6pg的溶液，[即得。 基质混合对照品溶液的制备取空白基质样品3g，一式6份，同供试品溶液的制备方法处理至"置氮吹仪上于40℃水浴浓缩至约 0.4ml"，分别加入混合对照品溶液 (100pg/L)50pl、 100pl，混合对照品溶液(1000pg/L)50pl、100pl、200pl、400pl，加乙腈定容至1ml，涡旋混匀，用微孔滤膜滤过(0.22pm)，取续滤液，即得系列基质混合对照品溶液。 供试品溶液的制备药材或饮片取供试品，粉碎成粉末(过三号筛)，取约3g，精密称定，置50ml聚苯乙烯具塞离心管中，加入1%冰醋酸溶液 15ml，涡旋使药粉充分浸润，放置30分钟，精密加入乙腈15ml 与内标溶液 100pl， 涡旋使混匀，置振荡器上剧烈振荡(500次/min)5分钟，加入无水硫酸镁与无水乙酸钠的混合粉末(4∶1)7.5g，立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡(500次/min)3分钟，，于冰浴中冷却10分钟， 离心(4000转/min)5分钟，取上清液9ml， 置已预先装有净化材料的分散固相萃取净化管[无水硫酸镁900mg， N-丙基乙二胺(PSA)300mg，，十八烷基硅烷键合硅胶300mg，硅胶300mg，石墨化炭黑90mg]中，涡旋使充分混匀，再置振荡器上剧烈振荡(500次/min)5分钟使净化完全，离心(4000转/min)5分钟，精密吸取上清液 5ml， 置氮吹仪上于40℃水浴浓缩至约 0.4ml，加乙腈定容至1ml，涡旋混匀，用微孔滤膜(0.22um)滤过，取续滤液，即得。 测定法精密吸取供试品溶液和基质混合对照品溶液各 1pl， 注入气相色谱-串联质谱仪，按内标标准曲线法计算供试品中74种农药残留量。 2.液相色谱-串联质谱法 色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长15cm，内径为3mm，粒径为3.5pm)；以0.1%甲酸(含10mmol/L 甲酸铵)溶液为流动相A，，以乙腈为流动相B，下表3进行梯度洗脱；柱温为35℃，流速为0.4ml/min。 表3 流动相梯度 时间(分钟) 流动相A(%) 流动相B() 0~1 95 5 1~4 95→40 5→60 4~14 40--0 60→100 14~18 0 100 18~26 95 5 质谱条件以三重四极杆串联质谱仪检测；离子源为电喷雾(ESI)离子源，使用正离子扫描模式。监测模式为多反应监测(MRM)，各化合物参考保留时间、监测离子对、碰撞电压(CE)和检出限参考值见见4。为提高检测灵敏度， 可根据保留时间分段监测各农药。对照品贮备溶液的制备、内标贮备溶液的制备、混合对照品溶液的制备、内标溶液的制备、基质混合对照品溶液的制备与供试品溶液的制备均同气相色谱-串联质谱法项下。 测定法分别精密吸取气相色谱-串联质谱法中的供试品溶液和基质混合对照品工作溶液各1?10pl(根据检测要求与仪器灵敏度可适当调整进样量)，注入液相色谱-串联质谱仪，按内标标准曲线法计算供试品中153种农药残留量。 【附注】(1)依据各品种项下规定的监测农药种类并参考相关农药限度规定配制对照品溶液。 (2)空白基质样品为经检测不含待测农药的同品种样品。 (3)加样回收率应在 70%?120%之间。在方法重现性可获得的情况下，部分农药回收率可放宽至50%?130%. (4)进行样品测定时，如果检出色谱峰的保留时间与对照品一致，并且在扣除背景后的质谱图中，所选择的监测离子对均出现，而且所选择的监测离子对峰面积比与对照品的监测离子对峰面积比一致(相对比例>50%，允许±20%偏差；相对比例>20%?50%，允许±25%偏差；相对比例>10%?20%，允许±30%偏差；相对比例≤10%，允许±50%偏差)，则可判断样品中存在该农药。如果不能确证，选用其他监测离子对重新进样确证或选用其他检测方式的分析仪器进行确证。 (5)气相色谱-串联质谱法测定的农药，推荐选择氛代倍硫磷作为内标；液相色谱-串联质谱法测定的农药，推荐选择代莠去津作为内标。 (6)方法提供的监测离子对测定条件为推荐条件，各实验室可根据所配置仪器的具体情况作适当调整；在样品基质有测定干扰的情况下，可选用其他监测离子对。 (7)对于特定农药或供试品，分散固相萃取净化管中净化材料的比例可作适当调整，但须进行方法学考察以确 保结果准确。 (8)在进行气相色谱-串联质谱法测定时，为进一步优化方法效能，供试品溶液最终定容的溶剂可由乙腈经溶剂替换为甲苯(经氮吹至近干加入甲苯1ml即可)。 表 4155种农药及内标对照品的保留时间、监测离子对、碰撞电压(CE)与检出限参考值 编号 中文名 英文名 保留时间(min) 母离子 子离子 CE(V) 检出限(mg/kg) 1 乙酰甲胺磷 Acephate 2.5 184.0 184.0 143.0 125.0 13 24 0.05 0.005 0.005 223.5 126.0 17 2 啶虫脒 Acetaniprid 4.1 223.5 90.0 43 270.1 270.1 238.1 162.1 15 26 3 甲草胺 Alachlor 6.6 0.005 4 涕灭威 Aldicarb 4.5 208.1 116.1 10 208.1 89.0 22 223.1 166.1 8 5 涕灭威砜 Aldicarb-sulfone 3.3 223.1 148.0 11 0.005 207.1 132.0 9 6 涕灭威亚砜 Aldicarb-sulfoxide 2.9 207.1 89.0 20 0.005 303.2 135.0 15 7 丙烯菊酯 Allethrin 9.1 303.2 169.0 12 0.25 续表 编号 中文名 英文名 保留时间(min) 母离子 子离子 CE(V) 检出限(mg/kg) 8 Ametryn 5.5 228.1 186.1 26 0.005 蒡灭净 228.1 96.1 34 9 莠去津 Atrazine 5.2 216.1 174.1 23 0.005 216.1 104.0 38 10 代莠去津 Atrazinc-d5(ethyl-d5) 5.1 221.0 178.8 35 221.0 101.1 35 11 乙基谷硫磷(益棉 Azinphos-ethyl 6.7 346.0 289.0 0.05 磷) 346.0 261.0 11 12 甲基谷硫磷(保棉 Azinphos-methyl 5.8 318.0 160.1 0.05 磷) 318.0 132.0 20 13 嘧菌酯 Azoxystrobin 5.9 404.1 372.1 18 0.005 0.005 404.1 344.1 32 14 苯霜灵 Benalaxyl 7.1 326.2 294.2 14 326.2 208.1 21 15 联苯肼酯 Bifenazate 6.2 301.1 170.1 29 0.005 0.05 301.1 198.1 15 16 联苯三唑醇 Bitertanol 6.4 338.2 269.2 10 338.2 99.1 18 343.0 307.1 26 17 啶酰菌胺 Boscalid 6.1 0.005 343.0 140.0 25 18 嚓嗪酮 Buprofezin 9.5 306.2 201.1 15 0.005 306.2 116.1 20 19 丁草胺 Butachlor 9.2 312.0 238.1 17 0.005 312.0 162.2 33 20 硫线磷 Cadusafos 7.6 271.0 159.0 21 0.005 271.0 97.0 51 21 甲萘威 Carbaryl 5.0 202.1 202.1 145.1 127.1 13 39 0.005 22 多菌灵 Carbendazim 3.4 192.1 160.1 21 0.005 192.1 132.1 40 23 克百威 Carbofuran 4.9 222.1 165.1 16 0.005 222.1 123.0 27 24 3-羟基克百威 Carbofuran-3-hydroxy 3.9 238.1 181.1 14 0.005 238.1 163.1 23 25 灭螨猛 Chinomethionat 7.9 235.0 207.0 25 0.05 235.0 163.0 38 26 氯虫酰胺 Chlorantraniliprole 5.4 481.9 450.9 23 0.005 481.9 283.9 20 27 毒虫畏 Chlorfenvinphos 6.9 359.0 155.0 16 0.005 359.0 127.0 22 28 烯草酮 Clethodim 8.6 360.1 268.1 14 0.005 360.1 164.1 23 续表 编号 中文名 英文名 保留时间(min) 母离子 子离子 CE(V) 检出限(mg/kg) 363.0 307.0 22 29 蝇毒磷 Coumaphos 7.6 363.0 227.0 35 0.05 30 氰氟草酯 Cyhalofop-butyl 8.6 375.2 358.1 10 0.05 375.2 256.1 22 31 嘧菌环胺 Cyprodinil 6.8 226.1 108.1 35 0.005 226.1 93.1 44 32 内吸磷 Demeton (O+S) 5.3 259.0 88.9 20 0.005 259.0 60.9 50 33 二嗪磷 Diazinon 7.6 305.1 277.1 19 0.005 305.1 169.1 29 34 除线磷 Dichlofenthion 9.3 314.9 258.9 23 0.05 314.9 286.9 17 35 百治磷 Dicrotophos 3.5 238.1 112.1 19 0.005 238.1 193.0 15 36 苯醚甲环唑 Difenoconazole 7.3 406.1 337.0 24 0.005 406.1 251.0 36 37 除虫脲 Diflubenzuron 6.2 311.0 158.0 21 0.005 311.0 141.0 45 38 二甲吩草胺 Dimethenamid 6.0 276.1 244.1 20 0.005 276.1 168.1 33 39 乐果 Dimethoate 4.0 230.0 199.0 13 0.005 230.0 125.0 29 40 烯唑醇 Diniconazole 6.7 326.1 159.0 42 0.05 326.1 70.0 53 41 乙拌磷 Disulfoton 8.1 275.0 275.0 89.0 61.0 18 49 0.1 42 乙拌磷砜 Disulfoton-sulfone 5.5 307.0 307.0 261.0 153.0 14 17 0.1 43 乙拌磷亚砜 Disulfoton-sulfoxide 5.0 291.0 291.0 213.0 185.0 13 20 0.005 44 克瘟散 Edifenphos 6.9 311.0 172.9 25 0.005 311.0 282.9 16 45 苯硫膦 EPN 8.2 324.1 296.0 18 0.005 324.1 157.0 30 46 乙硫苯戏 Ethiofencarb 5.1 226.1 106.9 21 0.005 226.1 164.1 11 47 Z乙硫磷 Ethion 9.5 385.0 199.0 14 0.005 385.0 142.9 36 48 灭线磷(丙线磷) Ethoprophos 6.2 243.1 215.0 17 0.005 243.1 130.9 29 49 醚菊酯 Etofenprox 11.8 394.2 359.2 15 0.05 394.2 177.1 21 续表 编号 中文名 英文名 保留时间(min) 母离子 子离子 CE(V) 检出限(mg/kg) 293.1 265.0 24 50 乙嘧硫磷 Etrimfos 4.0 293.1 125.0 42 0.005 51 苯线磷 Fenamiphos 5.9 304.1 276.1 19 0.005 304.1 217.0 31 52 苯线磷砜 Fenamiphos-sulfone 4.7 336.1 308.1 21 0.005 336.1 266.0 28 53 苯线磷亚砜 Fenamiphos-sulfoxide 4.3 320.1 292.1 21 0.05 320.1 233.0 34 54 氯苯嘧啶醇 Fenarimol 6.0 331.0 268.1 32 0.05 331.0 139.0 48 55 腈苯唑 Fenbuconazole 6.3 337.1 125.0 38 0.005 0.05 0.005 337.1 70.0 24 56 氧皮蝇磷 Fenchlorphos-oxon 6.0 304.9 272.9 30 304.9 109.0 31 57 Fenpyroximate 9.9 422.2 366.1 24 唑螨酯 422.2 215.1 35 58 丰索磷 Fensulfothion 5.2 309.0 281.0 20 0.005 309.0 253.0 25 59 氧丰索磷 Fensulfothion-oxon 4.0 293.1 265.0 20 0.005 293.1 237.0 21 60 氧丰索磷砜 Fensulfothion-oxon-sul- 4.5 309.1 281.0 15 0.005 fone 309.1 253.0 23 61 丰索磷砜 Fensulfothion-sulfonc 5.7 325.0 297.0 16 0.05 325.0 269.0 23 62 倍硫磷 Fenthion 7.2 279.0 247.0 18 0.05 279.0 169.0 24 63 代倍硫磷 Fenthion-d6 (0，o-dime 7.2 285.4 249.9 18 thyl-d6) 285.4 168.9 24 64 氧倍硫磷 Fenthion-oxon 5.2 263.1 231.0 22 0.05 263.1 216.0 32 65 氧倍硫磷砜 Fenthion-oxon-sulfone 4.1 295.0 295.0 217.1 104.1 26 34 0.1 66 氧倍硫磷亚砜 Fenthion-oxon-sulfoxide 3.8 279.0 279.0 264.0 247.0 26 36 0.005 67 倍硫磷砜 Fenthion-sulfone 5.3 311.0 279.0 25 0.1 311.0 125.0 28 68 倍硫磷亚砜 Fenthion-sulfoxide 4.9 295.0 280.0 26 0.05 295.0 109.0 40 69 精吡氟禾草灵 Fluazifop-P-butyl 9.0 384.1 384.1 328.1 282.1 24 29 0.005 70 氟硅唑 Flusilazole 6.3 316.1 247.1 25 0.005 316.1 165.1 37 续表 编号 中文名 英文名 保留时间(min) 母离子 子离子 CE(V) 检出限(mg/kg) 324.1 262.1 26 71 氟酰胺 Flutolanil 6.4 324.1 242.1 35 0.005 72 地虫硫磷 Fonofos 7.7 247.0 137.0 15 0.005 247.0 109.0 25 73 噻唑膦 Fosthiazate 5.0 284.1 228.0 14 0.005 284.1 104.0 32 74 呋线威 Furathiocarb 8.9 383.2 252.1 17 0.005 383.2 195.0 25 75 氟吡甲禾灵 Haloxyfop-methyl 7.9 376.1 316.0 25 0.005 376.1 288.0 35 76 己唑醇 Hexaconazole 6.4 314.1 185.0 30 0.05 0.005 0.005 314.1 159.0 41 77 环嗪酮 Hexazinone 4.4 253.0 171.1 25 253.0 71.1 45 78 烯菌灵 Imazalil 5.0 297.1 255.0 25 297.1 159.0 30 79 吡虫啉 Imidacloprid 3.9 256.0 209.1 23 0.005 256.0 175.1 28 80 茚虫威 Indoxacarb 7.9 528.1 293.0 19 0.005 528.1 249.0 23 81 异菌脲 lprodione 6.3 330.0 244.9 20 0.005 332.0 247.0 20 82 氯唑磷 Isazofos 6.9 315.0 163.0 22 0.005 315.0 120.0 35 83 异硫磷 Isofenphos 8.2 346.1 287.1 0.005 346.1 245.0 19 84 甲基异柳磷 Isofenphos-methyl 7.5 332.0 332.0 273.0 231.0 10 30 0.005 85 异丙威 Isoprocarb 5.3 194.0 152.0 11 0.005 194.0 137.0 13 86 稻瘟灵 Isoprothiolane 6.5 290.9 188.9 30 0.005 290.9 231.0 15 87 马拉氧磷 Malaoxon 4.8 315.1 269.0 11 0.005 315.1 127.0 17 88 马拉硫磷 Malathion 6.4 331.0 285.0 10 0.005 331.0 127.0 17 89 灭蚜威 Mecarbam 6.8 330.1 227.0 12 0.005 330.1 199.0 21 90 灭锈胺 Mepronil 6.3 270.1 228.1 20 0.005 270.1 119.0 32 91 甲霜灵 Metalaxyl 5.1 280.2 248.1 14 0.05 280.2 220.1 19 续表 编号 中文名 英文名 保留时间(min) 母离子 子离子 CE(V) 检出限(mg/kg) 241.0 209.0 12 92 虫螨畏 Methacrifos 5.8 241.0 125.0 26 0.1 93 甲胺磷 Methamidophos 1.8 142.0 125.0 19 0.005 142.0 94.0 21 94 杀扑磷 Methidathion 5.7 303.0 145.0 13 0.05 303.0 85.0 30 95 灭虫威 Methiocarb 5.6 226.1 169.1 14 0.005 226.1 121.1 26 96 灭多威 Methomyl 3.4 163.1 106.0 13 0.005 163.1 88.0 12 97 甲氧虫酰肼 Methoxyfenozide 6.2 369.2 313.2 10 0.005 369.2 149.1 24 98 异丙甲草胺 Metolachlor 6.6 285.0 253.0 19 0.005 285.0 177.0 33 99 速灭威 Metolcarb 4.6 166.0 109.1 17 0.05 166.0 94.0 43 100 草克净 Metribuzin 4.8 215.1 187.1 25 0.005 215.1 84.1 28 101 速灭磷 Mevinphos 3.8 225.1 193.0 11 0.005 225.1 127.0 22 102 草达灭 Molinate 6.3 188.1 126.1 19 0.05 188.1 55.1 34 103 久效磷 Moncrotophos 3.3 224.1 193.0 11 0.005 224.1 127.0 22 104 腈菌唑 Myclobutanil 5.9 289.1 125.0 50 0.005 289.1 70.0 24 105 敌草胺 Napropamide 6.3 272.2 199.1 26 0.005 272.2 171.1 26 106 5.5 0.005 N-去乙基甲基嘧 N-desethyl. 278.0 245.8 24 啶磷 pimiphos-methyl 278.0 249.8 24 214.0 183.0 15 107 氧化乐果 Omethoate 2.7 0.05 214.0 155.0 21 108 嗯草酮 Oxadiazon 9.2 345.1 303.0 19 0.05 345.1 220.0 28 109 噁霜灵 Oxadixyl 4.6 279.1 219.1 16 0.005 279.1 132.1 43 110 杀线威 Oxamyl 3.3 237.1 220.1 0.05 237.1 90.1 12 111 多效唑 Paclobutrazol 5.5 294.1 165.0 31 0.05 294.1 125.0 52 112 乙基对氧磷 Paraoxon-ethyl 5.2 276.0 248.0 14 0.05 276.0 220.0 22 续表 编号 中文名 英文名 保留时间(min) 母离子 子离子 CE(V) 检出限(mg/kg) 248.0 231.0 24 0.05 113 甲基对氧磷 Paraoxon-methyl 4.6 248.0 202.0 27 321.0 321.0 275.0 247.0 8 14 114 稻丰散 Phenthoate 7.3 0.005 115 甲拌磷 Phorate 7.8 261.0 75.0 19 0.005 261.0 47.0 49 116 氧甲拌磷 Phorate-oxon 5.2 245.0 245.0 5 0.005 0.005 245.0 75.0 10 117 氧甲拌磷砜 Phorate-oxon-sulfone 4.2 277.0 249.0 14 277.0 183.0 16 118 甲拌磷砜 Phorate sulfone 5.6 293.0 247.0 0.1 293.0 171.0 16 119 伏杀硫磷 Phosalone 7.8 368.0 322.0 14 0.05 0.05 368.0 182.0 23 120 亚胺硫磷 Phosmet 5.9 318.0 160.0 24 318.0 133.0 51 121 磷胺 Phosphamidon 4.3 300.1 227.0 19 0.005 0.05 300.1 174.1 19 122 辛硫磷 Phoxim 7.7 299.1 153.1 11 299.1 129.0 16 123 胡椒基丁醚 Piperonyl Butoxide 8.7 356.2 177.1 15 0.005 356.2 119.1 49 124 抗蚜威 Pirimicarb 4.7 239.1 182.1 22 0.05 239.1 137.1 32 125 嘧啶磷 Pirimiphos-ethyl 9.6 334.1 306.1 23 0.005 334.1 198.1 21 126 甲基嘧啶磷 Pirimiphos-methyl 8.1 306.1 164.1 30 0.005 306.1 108，1 39 127 丙草胺 Pretilachlor 8.2 312.0 252.1 23 0.005 312.0 132.1 63 128 咪酰胺 Prochloraz 7.0 376.0 308.0 17 0.005 376.0 70.0 45 129 丙溴磷 Profenofos 8.2 372.9 344.9 18 0.005 372.9 302.9 26 130 猛杀威 Promecarb 5.8 208.1 109.0 23 0.005 208.1 151.0 13 131 敌稗 Propanil 5.5 218.1 162.1 21 0.005 218.1 127.1 33 132 炔螨特 Propargite 9.9 368.2 231.2 14 0.005 368.2 175.1 23 133 胺丙畏 Propetamphos 6.6 282.0 138.0 25 0.005 282.0 156.0 19 续表 编号 中文名 英文名 保留时间(min) 母离子 子离子 CE(V) 检出限(mg/kg) 342.1 205.0 25 134 丙环唑 Propiconazole 6.8 342.1 159.0 35 0.05 135 Propoxur 4.8 210.1 168.1 11 0.005 残杀威 210.1 111.0 19 136 丙碗磷 Prothiophos 11.0 344.8 241.0 27 0.1 344.8 132.9 69 137 百克敏 Pyraclostrobin 7.5 388.1 296.1 19 0.005 388.1 194.1 17 138 哒螨灵 Pyridaben 10.7 365.0 147.0 31 0.005 365.0 309.0 19 0.005 322.1 227.1 21 139 吡丙醚 Pyriproxyfen 9.1 322.1 185.1 32 0.005 299.1 271.0 19 140 喹磷 Quinalphos 7.1 299.1 163.0 33 141 抑食肼 RH 5849 5.2 297.0 241.0 8 0.005 297.0 .105.0 25 142 治螟磷 Sulfotep 7.6 323.0 295.0 14 0.005 323.0 170.9 20 143 氟胺氰菊酯 Tau- fluvalinate 11.5 520.1 208.1 23 0.25 520.1 181.1 35 144 戊唑醇 Tebuconazole 6.2 308.1 125.0 55 0.005 308.1 70.0 27 145 抑虫肼 Tebufenozide 6.7 353.2 297.2 11 0.05 353.2 133.1 25 146 胺菊酯 Tetramethrin 8.8 332.0 332.0 314.0 286.0 12 13 0.05 3.5 202.0 175.0 35 0.005 147 噻菌灵 Thiabendazole 202.0 131.1 45 4.3 253.0 186.0 20 0.05 148 噻虫啉 Thiacloprid 253.0 126.0 30 3.6 292.0 211.1 18 0.005 149 噻虫嗪 Thiamethoxam 292.0 181.1 31 301.0 269.0 23 150 甲基立枯磷 Tolclofos-methyl 7.8 301.0 175.0 35 0.05 364.0 238.0 21 151 甲苯氟磺胺 Tolylfluanid 7.6 364.0 137.0 38 0.05 152 三唑磷 Triazophos 6.4 314.1 314.1 178.0 162.1 29 25 0.005 153 敌百虫 Trichlorfon 3.6 256.9 109.0 25 0.05 256.9 221.0 15 154 三环唑 Tricyclazole 4.3 190.0 163.0 28 0.005 190.0 136.0 34 155 肟菌酯 Trifloxystrobin 8.1 409.1 206.1 19 0.005 409.1 186.1 18 注：其中编号10、63为内标. ·· 22种有机氯类农药残留量测定法色谱条件及系统适用性试验 分析柱：以50%苯基50%二甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)，验证柱：以100%二甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)，63Ni-ECD电子捕获检测器。进样口温度240℃，检测器温度300℃,不分流进样，流速为恒压模式(初始流速为1.3ml/min)。程序升温：初始70℃，保持1分钟，每分钟10℃升至180℃，保持5分钟，再以每分钟5℃升至220℃，最后以每分钟100℃升至280℃，保持8分钟。理论板数按α-BHC计算应不低于1×106，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。对照品贮备溶液的制备 精密称取表1中农药对照品适量，用异辛烷分别制成如表1中浓度，即得。混合对照品贮备溶液的制备 精密量取上述对照品贮备溶液各1ml，置100ml量瓶中，用异辛烷稀释至刻度，摇匀，即得。混合对照品溶液的制备 分别精密量取上述混合对照品贮备溶液，用异辛烷制成每1L分别含10μg、20μg、50μg、100μg、200μg、500μg的溶液，即得(其中β-六六六、异狄氏剂、p,p'-滴滴滴、o,p'-滴滴涕每1L分别含20μg、40μg、100μg、200μg、400μg、1000μg)。供试品溶液的制备 取供试品，粉碎成粉末（过三号筛），取约1.5g，精密称定，置于50ml聚苯乙烯具塞离心管中，加入水10ml，混匀，放置2小时，精密加入乙腈15ml，剧烈振摇提取1分钟，再加入预先称好的无水硫酸镁4g与氯化钠1g的混合粉末，再次剧烈振摇1分钟后，离心(4000转/分钟)1分钟。精密吸取上清液10ml，40℃减压浓缩至近干，用环己烷-乙酸乙酯(1:1)混合溶液分次转移至10ml量瓶中，加环己烷-乙酸乙酯(1:1)混合溶液至刻度，摇匀，转移至预先加入1g无水硫酸钠的离心管中，振摇，放置1小时，离心(必要时滤过)，取上清液5ml过凝胶渗透色谱柱(400mm×25mm,内装BIO-Beads S-X3填料；以环己烷-乙酸乙酯(1:1)混合溶液为流动相；流速为每分钟5.0ml)净化，收集18?30分钟的洗脱液，于40℃水浴减压浓缩至近干，加少量正己烷替换两次，加正己烷1ml使溶解，转移至弗罗里硅土固相萃取小柱[1000mg/6ml，用正己烷-丙酮(95:5)混合溶液10ml和正己烷10ml预洗]上，残渣用正己烷洗涤3次，每次1ml，洗液转移至同一弗罗里硅土固相萃取小柱上，再用正己烷-丙酮(95∶5)混合溶液10ml洗脱，收集全部洗脱液，置氮吹仪上吹至近干，加异辛烷定容至1ml，涡旋使溶解，即得。测定法 分别精密吸取供试品溶液和混合对照品溶液各1μl，注入气相色谱仪，按外标标准曲线法计算供试品中22种有机氯农药残留量。