饲料中孔雀石绿检测方案(固相萃取)

青岛心成发展商贸有限公司 饲料中孔雀石绿检测的固相萃取方法 WGLabs ALN/PRS 一、实验目的 本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测水产品中孔雀石绿含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。 二、实验目标物 孔雀石绿(CAS：569-64-2) 三、应用范围 本方法适用于水产品中孔雀石绿的检测的HPLC检测及及证。 四、参考标准 《NY/T 1756-2012饲料中孔雀石绿的测定》。 五、实验材料 WGLabs 中性氧化铝固相萃取柱1g/3ml、WGLabs PRS 固相萃取柱500mg/3ml 六、实验方法 1、样品提取 准确称取样品5.0 g于50 mL离心管中加入1.5 mL 20%的盐酸羟胺，1.0 mol/L的对甲苯磺酸2 mL，5.0mL乙酸钠-对甲苯磺酸缓冲液(PH4.5)，加入20 mL乙腈，加入2g中性氧化铝，震荡2 min， 超声30 min， 离心机离心5 min(4000 r/min)， 取上清液转移至分液漏斗中。加入20 mL乙腈至离心管中，重复上述提取一次，合并乙腈层。分液漏斗中加入50 mL氯化钠，50 mL二氯甲烷，震摇10 s， 静置分层，取二氯甲烷层于梨形瓶中。继续用20 mL二氯甲烷重复上述提取一次，合并两次提取的二氯甲烷层。梨形瓶35℃旋转蒸发至近干，再用5 mL乙腈溶解，备用。 2、SPE柱净化 (1)活化：按照中性氧化铝柱在上，PRS柱在下顺序将两柱串联，固相萃取柱使用前使用5 mL乙腈活化。(2)上样和洗脱：将备用液转移至中性氧化铝柱中净化，梨形瓶使用2.5mL×2的乙腈洗涤瓶两次，洗涤液转移至中性氧化铝柱内，最后取5 mL乙腈洗涤小柱，保持流速1 mL/min。再弃去流出液，弃去中性氧化铝柱，PRS柱使用2 mL乙腈-乙酸钠缓冲液(6：4， v/v)、1 mL 20%盐酸羟胺-甲醇溶液(1：99，v/v)洗脱，收集洗脱液。 (3)重新溶解：洗脱液用乙乙-乙酸钠缓冲液(6：4，v/v)定容到3mL，过0.45pm滤膜，待上机测试。 3、HPLC条件 设备：Waters Alliance 2690 色谱柱： Welch UltimateXB-C18 (4.6×250mm， 5um) 检测器： Waters 2487 紫外检测器 流动相：A：乙青 B：0.05mol/L乙酸铵缓冲溶液 洗脱方式：梯度洗脱 表1梯度洗脱条件 时间/min A% B% 60 40 3.00 60 40 3.10 80 20 10.00 80 20 10.10 60 40 13.00 60 40 流速：1.2mL/min 检测波长：618nm 进样体积：50uL 七、实验结果 1、0.3mg/kg鱼肉基质中孔雀石绿的添加回收结果 表2 0.3mg/kg鱼肉基质中孔雀石绿的添加回收结果 目标物 回收率(%) 平均 回收率(%) RSD(%) 1 2 3 孔雀石绿 92.0 93.2 92.0 92.4 0.75 2、添加水平为0.3mg/kg鱼肉中孔雀石绿检测色谱图 图1添加水平为0.3mg/kg鱼肉中孔雀石绿检测色谱图 1孔雀石绿 1 分钟 本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测水产品中孔雀石绿含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。参考标准《NY/T 1756-2012 饲料中孔雀石绿的测定》具体操作步骤详见附件！！！