在2015年新版药典中新增 As 和 Hg 形态分析作为指导原则。进一步确定了药物中的元素不仅需要考虑总量,也需要考虑形态和价态;元素的价态形态已经成为药物科研的一个前沿方向。新版药典As的形态价态分析主要体现在含雄黄的中成药,如安宫牛黄丸中可溶性As的分析;Hg元素的形态分析主要体现在含朱砂的药物,如在建立方法时测定了安宫牛黄丸中可溶性Hg。
根据2015年新版药典,电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法已经成为重金属安全性的检测的重要手段,不但新增了方法检出限和方法定量限,而且ICPMS方法可用于 I、II、III 部。
As化合物被认为是对人的皮肤和肺有致癌作用的物质,不同形态的As具有各种化学和毒物学性质,其中As(III)和As(Ⅴ)的毒性最大,一甲基砷(MMA)和二甲基砷酸(DMA)具有中等毒性,而As-甜菜碱(AB)和砷胆碱(AC)相对来说是无毒的。在动物体内,无机砷的生物甲基化作用被认为是一个去毒性过程,产物被排泄或储存。为分析低含量(ppb级)As化合物的形态,不仅需获得有关化合物形态的信息,又要有极高的灵敏度,目前最为理想的方法应属HPLC或IC与ICP-MS联用,该方法对于砷化合物的生物检测极为有用。
Hg是人体必需监控的有毒元素,主要以甲基汞、Hg(II) 与乙基汞形式存在,其中生物与人类对Hg的甲基化及富集所产生的影响尤为重要。目前,WHO法规不仅对人体中总Hg的限量极低(<5ppb),还对人体中甲基汞的最高含量也作出了明确规定(<3.3ppb),各国法规亦纷纷效仿以严格控制上述有毒物质。对于甲基汞的测定,以前多采用GC法,但该法灵敏度低,且分析速度慢并对人员要求较高。而HPLC-ICP-MS联用不仅可以同时分析不同形式的Hg,而且灵敏度高、易于操作,大大满足了日益严格的法规要求,有望成为标准分析方法。
针对元素形态分析的样品前处理与元素的总量分析有着较大的不同。对于注射剂、口服液等液体制剂中微量元素形态分析,可在过滤和稀释后直接进行形态的分离分析;而对于固体样品,则需要采用较温和的方法将微量元素的不同形态提取出来。提取方法既要考虑较高的回收率,又要保持初始的化学形态。传统的提取方法有水煎法、索氏提取法等。近几年,一些先进的提取技术如超临界流体萃取、微波辅助萃取等在中药微量元素形态分析中也有应用。
由于西药多为人工合成药,而中药大部分是天然产物,因此元素的形态分析多应用于中药中。而中药的常用剂型为水煎剂和酊剂,所以报道较多的是研究中药中微量元素在水或乙醇中的溶出率。目前样品前处理方法制药分三类:第一类也是最常见的一类方法为经典的水提法或索氏提取法,例如王京宇等[2]在考察若干中药中25种元素在不同浸取液中的分布情况时,采用了水提、二氯甲烷浸取、残渣消化及不同浓度乙醇浸取等方法处理;第二类为超临界流体萃取[3],该方法是一种新型的分离提取技术,具有可低温处理、不发生氧化变质、萃取效率高、无溶剂残留和可选择性分离等优点。近年来我国正逐渐用该法提取中药有效成分。第三类为微波萃取[4]即微波辅助萃取(microwave assisted extraction,MAE),是在微波能的作用下,选择性地将样品中的目标组分以其初始形态的形式萃取出来的一种技术。它具有高回收率、高选择性和低溶剂消耗的优点。值得一提的是厦门大学王小如领导的课题组在这个领域做了很多尝试,并取得了一些有意义的成果。
1. 形态分析中LC所使用的流动相通常含有较高浓度缓冲盐和有机质(甲醇或乙腈)。而通常情况下ICPMS仪器抗高盐能力较弱,无法承受长时间高盐高有机质样品的分析。而Agilent的ICPMS采用了专利的采样锥与截取锥优化系统技术,小锥孔使进入质谱仪高真空部分的污染物或基体减少,保持高真空部件洁净,减少清洗维护,提高仪器的长时稳定性与可靠性;锥系统采用特殊的热力学设计,有效地提高了抗高盐能力。
2. 形态分析中所使用的高盐高有机质的流动相会引入多种多原子分子干扰,例如 Cl,C,O等对As,Cr或Se形态分析的干扰。Agilent专利的Shield Torch系统极大地降低了ICP-MS仪器的固有干扰, 同时专利的八极杆反应池系统高效的消除了多原子离子对分析元素的干扰。
3. 在联用技术方面,色谱尤其是液相与ICP-MS联用的接口技术以及色谱与质谱的同步控制、实时显示是方法的突出难点。Agilent具备一流的色谱与ICP-MS接口技术,它首次将ICPMS与色谱联用实现一体化:无需打开另一套软件;无需切换操作界面;可在原有操作界面实现LC与ICPMS的完全控制,使形态分析成为标准技术。
详细的解决方案见:安捷伦2015版药典中元素形态分析解决方案