T7 Endonuclease I
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1362-250U | 250U | T7 Endonuclease I |
P-PR1362-2500U | 2500U | T7 Endonuclease I |
产品介绍:
描述:
T7 核酸内切酶 I 识别并切割不完全配对 DNA、十字型结构 DNA、Holliday 结构或交叉 DNA、异源双链 DNA 或者以更慢的速度切割含切刻的双链 DNA。该酶切割错配碱基 5′ 端的第一、第二或第三个磷酸二酯。
本产品是通过克隆重组表达 T7 核酸内切酶 I 基因,获得的高纯度蛋白,该酶无其他内切酶或外切酶污染。
活性定义:
在 50 μl 反应体系,37℃ 条件下,1 小时将90% 以上的 1 μg 超螺旋十字型结构的 pUC(AT)* 转化成 90% 以上的线性结构所需要的酶量定义为一个活性单位。
应用:
基因突变、SNP、TALEN 或 CRISPR/Cas9 形成的突变体检测识别错配 DNA分解四方向交叉 DNA 或分支 DNA检测或切割异源二聚体 DNA 和切刻 DNA随机切割线性 DNA 进行 shot-gun 克隆1X T7 Endonuclease I Buffer:
50 mM NaCl,10 mM Tris-HCl,10 mM MgCl2 ,1 mMDTT(pH 7.9 @ 25℃)
酶储存液:50 mM Tris-HCl, 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% Glycerol, pH 7.5。
储存:置于-20°C 可保存 2 年,避免反复冻融。
注意事项:
(1) T7 核酸内切酶 I 是一种具有底物结构选择性的酶;该酶以不同的活性作用于不同的 DNA 底物。切割特定底物,必须控制酶量和反应时间。
(2)反应温度超过 42℃时,会增加非特异性核酸酶活性。
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
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