Gibson无缝克隆试剂盒

Gibson无缝克隆试剂盒

商品属性：

 产品介绍：

Gibson 无缝连接试剂盒是一种混合酶系统，其可将任意方法线性化的载体和与其两端具有重叠区域的一个或多个 PCR 片段定向重组连接。该方法不依赖于 T4 DNA 连接酶，不受载体和目的片段的酶切位点限制，可在 30 分钟内实现 PCR 片段高效定向无缝克隆至载体的任意位置，从而获得完整的双链 DNA 分子。该试剂盒使用简单，只需加入合适比例的载体和 PCR 片段在室温孵育 15-30min 即可完成片段的连接。

原理：

T5 外切酶可从双链 DNA5'端切割形成 3'突出末端， 从而促进重叠区域的具有互补序列的片段进行退火。高保真 DNA 聚合酶可使退火的片段向 3'端延伸，从而填补片段缺口。Taq DNA 连接酶可封闭缺刻从而获得完整的双链 DNA 分子。

优势：

1. 室温孵育即可完成片段的连接,无需 50℃。
2. 不受载体或插入片段酶切位点限制在任意位置进行无缝克隆
3. 不依赖于 T4 连接酶，高效连接，无碱基缺失
4. 可同时高效连接一个或多个 PCR 片段
5. 无需额外的亚克隆，菌检阳性率高达 95%  

pcr相关试剂实验结果分析：

PCR实验结果的分析涉及多个方面，‌包括实验操作、‌试剂质量、‌实验条件等，‌这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。‌以下是对PCR实验结果分析的一些关键点：‌

循环次数过多：‌增加模板量减少循环次数，‌缩短退火时间及延伸时间，‌或改用两种温度的PCR循环，‌可以有效避免循环次数过多导致的问题。‌

退火温度过低：‌退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要，‌过低的退火温度可能导致非特异性扩增，‌影响结果的准确性1。‌

电泳体系问题：‌包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、‌凝胶没有凝固好、‌琼脂糖质量差等问题，‌这些都会影响DNA片段的分离效果。‌

试剂盒问题：‌运输储存不当可能引起试剂盒失效，‌试剂盒本身质量问题如引物选择、‌循环参数设置不当也可能导致实验失败1。‌

降解的陈旧模板：‌使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布，‌影响结果的解读1。‌

PCR假阴性结果：‌可能由引物长度不够、‌试剂浓度不标准、‌靶序列突变或缺失、‌循环参数设置错误、‌标本中有Taq酶抑制剂、‌PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。‌

为了获得准确的PCR实验结果，‌需要注意以下几点：‌

确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。‌

在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测，‌以便及时对反应条件进行调整。‌

防止样本的污染和交叉感染，‌以免影响PCR反应的准确性和可靠性。‌

通过上述分析，‌可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素，‌从而提高实验结果的准确性和可靠性。‌

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