LAMP Loop DP-Probe (订制品)

LAMP Loop DP-Probe (订制品)

商品属性：

 产品介绍：

描述：

该 DP-Probe(DisPlaceable Probe)为链置换荧光探针，专用于LAMP 的荧光扩增。Loop DP-Probe 在搭配 HotStart Bst4.2 Basic 试剂时表现出极为出色的特异性，可以大幅降低非特异性扩增。LoopDP-Probe Pair 是将 Loop 引物进行改造（LF/B 任意一条均可），其由两条标记引物退火组成：荧光猝灭引物（5’IBFQ+Tail+Loop）和荧光报告引物（Tail 互补区+3’发光基团），其不发荧光。在 LAMP反应中 Loop 引物渗入到“哑铃”结构，由扩增返回“哑铃”延伸并置换游离的荧光报告引物，累积产生荧光信号。详细的原理可参考文献 PMID: 33626039。有经验的研究人员可根据参考文献自行制备 LAMP Loop DP-Probe Pair，经验不足的人员可委托  来制备， 提供三种荧光标记的探针。需要客户提供 Loop 序列，并指明需要的荧光标记（FAM/JOE/ROX）。

eLAMP DP-Probe 试剂的开发简述：

1. 引物的粗筛选
无论是变色、试纸条、荧光法 eLAMP 试剂的开发，前期的测试过程， 推荐采用价格较低的液体 HotStart Bst4.2 SYBR Green试剂（进行粗筛选。通常筛选的引物为 3-5 组。10xeLAMP Mix：FIP/BIP=8 μM each; LF/LB=4 μM each.测试样品：10e3、100、25、10Copies/管，NTC(16-32 重复)
2.5xBst4.2 SYBR Green Mix 10 μl
10x ePrimer Mix 2.5 μl
HotStart Bst 4.2（8U/μl） 1 μl
模板 DNA/RNA X μlddH2O 到总体积 25 μl置于 70°C 反应 45min，1min 收集一次荧光信号。

良好的引物组具有 以 下 特 性 (Ct) ：

10e3copies =5-10min; 25copies <15min;10Copies<20min, NTC 均>40min. 以上实验需要反复确认，以确
保核心引物的工作效率，否则重新筛选，再进行后续的其它测试。
2. Loop DP-Probe Pair 的制备
根据上述引物组的筛选情况，选取最佳引物组。在此基础上改造LF 或 LB，改造哪一条效果更佳，必须经过测试。下面以改造 LF为例进行说明。 通常提供 25x 的 LF DP-Probe Pair（或自行制备）。

注意：

（1）测试试剂更改为 HotStart Bst4.2 Basic 试剂。

（2）10xeLAMP Mix 引物浓度有调整。
10xeLAMP Mix：FIP/BIP=8 μM each; LB=4 μM；LF=3 μM.
2.5xBst4.2 Basic Mix 10 μl
10x ePrimer Mix 2.5 μl
25x LF DP-Probe Pair 1 μl
HotStart Bst 4.2（8U/μl） 1 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到总体积 25 μl
置于 70°C 反应 45min，1min 收集一次荧光信号（注意根据探针荧光标记，选取正确的荧光通道）。与 SYBR Green 结果相比来看，时间会滞后 1-3min。NTC 的控制会明显提升。

此时可进一步做后续的其它项目测试。
3. 如有试剂冻干制备的需求可采用如下几种方案：
（1）(液体试剂)+PrimerMix 自行冻干（专业人员使用）。
（2）PrimerMix+(引物冻干剂)自行冻干，加入 (冻干球)。
（3）（HotStart Bst4.2），全程自行冻干（专业人员使用）。
（4）委托  进行全体系冻干。

pcr相关试剂实验结果分析：

PCR实验结果的分析涉及多个方面，‌包括实验操作、‌试剂质量、‌实验条件等，‌这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。‌以下是对PCR实验结果分析的一些关键点：‌

循环次数过多：‌增加模板量减少循环次数，‌缩短退火时间及延伸时间，‌或改用两种温度的PCR循环，‌可以有效避免循环次数过多导致的问题。‌

退火温度过低：‌退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要，‌过低的退火温度可能导致非特异性扩增，‌影响结果的准确性1。‌

电泳体系问题：‌包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、‌凝胶没有凝固好、‌琼脂糖质量差等问题，‌这些都会影响DNA片段的分离效果。‌

试剂盒问题：‌运输储存不当可能引起试剂盒失效，‌试剂盒本身质量问题如引物选择、‌循环参数设置不当也可能导致实验失败1。‌

降解的陈旧模板：‌使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布，‌影响结果的解读1。‌

PCR假阴性结果：‌可能由引物长度不够、‌试剂浓度不标准、‌靶序列突变或缺失、‌循环参数设置错误、‌标本中有Taq酶抑制剂、‌PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。‌

为了获得准确的PCR实验结果，‌需要注意以下几点：‌

确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。‌

在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测，‌以便及时对反应条件进行调整。‌

防止样本的污染和交叉感染，‌以免影响PCR反应的准确性和可靠性。‌

通过上述分析，‌可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素，‌从而提高实验结果的准确性和可靠性。‌

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