EasyMut gene multisite mutagenesis kit(多点突变试剂盒)
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1236-20次 | 20次 | EasyMut gene multisite mutagenesis kit(多点突变试剂盒) |
产品介绍:
产品储存:请按产品指示温度保存各成分
产品介绍:
本产品利用无缝克隆技术来实现基因的定点突变,可用于单点突变和多点突变质粒的构建。本产品无需除去甲基化模板质粒,无需PCR扩增出整个质粒,并且引物设计更加简便快速,因此可以更加快速,高效地实现定点突变。
产品特点:
1. 利用2×Xerox PCR Master Mix扩增片段,缩短扩增时间(2-4 kb/min),提高保真性;
2. 引物设计更加简单,快速;
3. 省略消化甲基化模板质粒的步骤,更加快速,高效;
4. 无需PCR扩增出整个质粒,减少载体的突变。
实验步骤:
一、突变位点的引物设计
1. 突变位点引物设计要求 :
(1)在每个突变位点处需设计一对引物,且突变位点在重叠区约中部位置。可以先设计正向引物,然后通过反向互补得到反向引物。
(2)引物的长度通常为30-40个碱基,突变位点两侧的碱基数在15-20个左右,GC%含量在40%-60%为最佳。
(3)避免引物末端为重复序列。
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
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