20min全能基因组DNA提取试剂盒

20min全能基因组DNA提取试剂盒

商品属性：

 产品介绍：

描述：

该试剂盒采用独特的裂解液，可快速可靠的从动物组织、细胞、细菌、病毒、全血、血清、血浆、体液、病毒液、棉拭孖等样品中纯化出高纯度的 DNA。可直接用于限制性酶切反应、PCR、文库构建、Southern 杂交等多种分子生物学实验

操作方法：

（一）RNA 含量较高的动物组织、细胞、细菌样本的提取方法
（1） 样品组织悬液的制备：动物组织用研钵研磨：将动物组织研磨粉碎，并取 40~60 mg 加入到 1.5ml EP 管中，加入 280 μl 无菌水，漩涡震荡 10s混合均匀，打开管盖加入 50 μl 的 Buffer AP4 裂解液和 5 μl 的 RnaseA，漩涡震荡 10s 混合均匀，室温消化 5min，以去除RNA。动物组织用钢珠研磨：取 50~80 mg 组织加入到 400 μl 无菌水，在研磨仪上研磨 1min。在 1.5 ml EP 管底部加入 50 μl 的Buffer AP4 裂解液，并在管盖上加入 5 μl 的 RnaseA，取 280 μl 研磨好的组织悬液到 1.5 ml EP 管中，漩涡 10s 混合均匀，室温消化 5min，以去除 RNA。悬浮的细胞（104~108 个）或细菌（106~1011 个）：在 1.5 ml EP 管底部加入 50 μl 的 Buffer AP4 裂解液，并在管盖上加入5 μl 的 Rnase A，直接吸取 280 μl 样品到上述 EP 管中，漩涡震荡 10s 混合均匀，室温消化 5min，以去除 RNA。细胞或细菌沉淀：可用 280 μl 无菌水重悬细胞和细菌沉淀，并加入 50 μl 的 Buffer AP4 裂解液和 5 μl 的 RnaseA，漩涡震荡 10s 混合均匀，室温消化 5min，以去除 RNA。
（2）RNA 消化完毕后，向上述溶液中加入 20 μl 的蛋白酶 K，漩涡 10s 混合均匀，并置于 56℃水浴锅(或室温条件下)中消化 5min。
（3）消化完毕后，向上述溶液中加入 500 μl 的 Buffer LB5，漩涡混合 15s 后，13000rpm 最高转速离心 2min。将上清液倒入到吸附柱中。
（4）13000rpm 离心 1min，弃过柱液。向吸附柱中加入 500 μl 的 Washing Buffer，13000rpm 离心 15s。弃过柱液，并重复此步骤一次。
（5）将吸附柱重新放回离心机，13000rpm 空离心 2min，将残留的乙醇彻底甩干。
（6）将吸附柱芯放入到 1.5 ml 收集管中，向吸附柱芯中加入 60~150 μl DNA Elution Buffer，室温放置 1min，13,000rpm离心 2min，洗脱液即为基因组 DNA，冷冻保存。
（二）RNA 含量较低的样本（全血、血清、血浆、体液、病毒液、棉拭孖浸泡液等）的提取方法在 1.5 ml EP 管底部预先加入 50 μl 的 Buffer AP4 裂解液，在管盖上加入 20 μl 的蛋白酶 K，直接吸取 280 μl 的液体样本到 Buffer AP4 裂解液中。上下颠倒，并漩涡混合 10s，使得样品、Buffer AP4 裂解液、蛋白酶 K 混合均匀，并置于 56℃水浴锅中（或室温）消化 5min。按照上述步骤（3）-（6）进行上柱、漂洗、洗脱操作。

pcr相关试剂实验结果分析：

PCR实验结果的分析涉及多个方面，‌包括实验操作、‌试剂质量、‌实验条件等，‌这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。‌以下是对PCR实验结果分析的一些关键点：‌

循环次数过多：‌增加模板量减少循环次数，‌缩短退火时间及延伸时间，‌或改用两种温度的PCR循环，‌可以有效避免循环次数过多导致的问题。‌

退火温度过低：‌退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要，‌过低的退火温度可能导致非特异性扩增，‌影响结果的准确性1。‌

电泳体系问题：‌包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、‌凝胶没有凝固好、‌琼脂糖质量差等问题，‌这些都会影响DNA片段的分离效果。‌

试剂盒问题：‌运输储存不当可能引起试剂盒失效，‌试剂盒本身质量问题如引物选择、‌循环参数设置不当也可能导致实验失败1。‌

降解的陈旧模板：‌使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布，‌影响结果的解读1。‌

PCR假阴性结果：‌可能由引物长度不够、‌试剂浓度不标准、‌靶序列突变或缺失、‌循环参数设置错误、‌标本中有Taq酶抑制剂、‌PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。‌

为了获得准确的PCR实验结果，‌需要注意以下几点：‌

确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。‌

在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测，‌以便及时对反应条件进行调整。‌

防止样本的污染和交叉感染，‌以免影响PCR反应的准确性和可靠性。‌

通过上述分析，‌可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素，‌从而提高实验结果的准确性和可靠性。‌

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