耐热双链特异性AP核酸内切酶

ThermoStable dsAP Nuclease (耐热dsAP核酸内切酶) 来源于嗜热菌，是一种热稳定的特异性识别双链脱嘌呤/脱嘧啶(AP)位点的核酸内切酶。该酶可切割AP位点5’端的第一个磷酸二酯键，产生3´羟基和5´脱氧核糖磷酸末端(deoxyribose phosphate, dRP)。该酶作用底物为双链DNA(含AP位点)，对单链DNA(含AP位点)、ssDNA、dsDNA无活性。该酶的最佳活性温度为60-70°C，在85°C以上温度逐步失活。

组分

单位定义

一单位指，在10µl反应体系中，60°C反应15min，切割1 pmol 含一个AP位点的寡核苷酸双链，所需要的酶量。

储存

置于-20°C，可保存2年。

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

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应用实例3：采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2，结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性，而60℃条件下1min内酶活完全释放，恢复100%活性