热敏双链DNA特异性核酸酶(Heat labile ds-DNA-specific Nuclease,又名ezDNase或HL dsDNase),为双链特异性核酸酶。它可特异性地识别降解双链DNA,对单链DNA或RNA几乎无活性,其降解dsDNA的能力比ssDNA高~5000倍。此外,该双链DNA特异性核酸酶降解双链DNA的能力比bovine DNaseI高~30倍,从而特别适用于去除RNA样品中的基因组DNA污染。该热敏双链DNA核酸酶可将DNA降解为2~8bp的产物,且55℃ 5min可使该酶不可逆失活,同时又能保持RNA和ssDNA的稳定性。另外,该酶适合于对基因组样品进行酶法片段化反应。
单位定义
1单位指25°C条件下15min将10μg基因组DNA消化至80%的产物<500bp所需的酶量。
储存
置于-20°C,可保存3年。
使用注意事项
(1)1×dsDNase Buffer:20mM Tris-HCl pH8.0, 5mM MgCl2。该酶需要1~5mM MgCl2。
(2)该酶对K+敏感,反应体系中推荐K+浓度低于40 mM。
(3)通常在RT反应中的用量为0.1~0.5U/20 μl体系。
(4)任何浓度的SDS、盐酸胍均抑制该酶活性。
(5)该酶的最佳反应温度为25~37℃,42℃ 30min后活性损失70%。
应用实例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果,可以看到检测反应<20min(达平台期)。
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应用实例2: 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略,在反应结束后,倒置反应管,溶解管盖上染料后,阳性样本呈现出醒目的绿色,阴性表现出橙色,区分明显。且该方法不受样本类型限制,杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。
![](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/1ab7e4d0-ee4e-4ac0-a331-5e5047ebd645.jpg)
应用实例3:采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2,结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性,而60℃条件下1min内酶活完全释放,恢复100%活性
![](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/8dc01f70-54d3-4033-9cef-16f757dacbab.jpg)
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