核糖核酸酶H(RNase H)是一种核糖核酸内切酶,它能够特异性地降解杂交到DNA链上的RNA磷酸二酯键,故能降解RNA/DNA杂交链中的RNA链。该酶不能消化单链或双链DNA。该RNase H酶广泛用于除去杂交到poly(dT)上的 mRNA poly(A)或除去cDNA第二链合成时mRNA。
单位定义
1单位指50μl反应体系中,37℃条件下,20min内从40pmol 长度为25bp的RNA-DNA杂交链中水解出1nmol核酸底物所需的酶量。
储存
置于-20°C,可保存3年。
使用注意事项
(1)1×Rnase H Buffer:75mM KCl,50mM Tris-HCl pH 8.3,5mM MgCl2,10mM DTT。
(2)该酶的最佳反应温度为37°C,65°C 20min使该酶失活。
应用实例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果,可以看到检测反应<20min(达平台期)。
应用实例2: 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略,在反应结束后,倒置反应管,溶解管盖上染料后,阳性样本呈现出醒目的绿色,阴性表现出橙色,区分明显。且该方法不受样本类型限制,杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。
应用实例3:采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2,结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性,而60℃条件下1min内酶活完全释放,恢复100%活性
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