SUMO蛋白酶,也称为UIP蛋白酶,是一种具有较高活性的半胱氨酸蛋白酶,来源于酵母编码的MIP1基因,其特异性识别UBL蛋白的三级结构-SUMO(Small Ubiquitin-Like Modifier)。SUMO蛋白酶能够识别完整的SUMO序列,并依赖正确的蛋白质构象,仅有完整的序列,没有正确的结构,SUMO酶是不能对目标蛋白进行切割的。因此,该酶是目前切割特异性最好的蛋白酶,可在较广泛的作用温度和PH范围(pH7-9)内发挥作用,切割的最佳温度为30°C。SUMO蛋白酶的识别序列如下,切割位点位于QIGG之后 SDSEVNQEAKPEVKPEVKPETHINLKVSDGSSEIFFKIKKTTPLRRLMEAFAKRQGKEMDSLRFLYDGIRIQADQTPEDLDMEDNDIIEAHREQIGG
本公司生产的SUMO蛋白酶含有双His标签,酶切后,可通过Ni-NTA Resin亲和纯化,很容易地将SUMO去除;双His标签保证了,SUMO蛋白酶高亲和力的结合Ni-NTA,以最大限度的去除SUMO蛋白酶。该SUMO蛋白酶分子量约26kD。
单位定义
在1XSUMO Protease Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 0.2% Igepal, 1 mM DTT)中,30°C反应1h,剪切>85%的100pmol底物,所需要的酶量定义为一个活性单位。
储存
SUMO蛋白酶置于-20°C可保存2年。
应用实例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果,可以看到检测反应<20min(达平台期)。
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应用实例2: 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略,在反应结束后,倒置反应管,溶解管盖上染料后,阳性样本呈现出醒目的绿色,阴性表现出橙色,区分明显。且该方法不受样本类型限制,杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。
![](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/1ab7e4d0-ee4e-4ac0-a331-5e5047ebd645.jpg)
应用实例3:采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2,结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性,而60℃条件下1min内酶活完全释放,恢复100%活性
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