RTS BL21(DE3)Chaprone助溶表达感受态

BL21(DE3)Chaprone感受态细胞中含有分子伴侣蛋白质粒，其表达产物可协助重组蛋白正确折叠形成可溶活性蛋白。分子伴侣蛋白质粒为氯霉素抗性（chloramphenicol，Cmr）的表达受控于四环素（tetR）操纵子，因此该感受态不适用于氯霉素抗性表达质粒的转化。

本BL21(DE3)Chaprone感受态细胞使用HaiGene独有的化学感受态专利技术制备，其室温可保存3天、-20°C可保存2年（推荐保存温度）、-80°C可长期保存性能无下降。运输过程中无需干冰，可室温运输、可常规冰袋运输（推荐运输温度）。该感受态细胞为热激感受态细胞，转用于蛋白表达（不可用于克隆和载体构建），经42°C热激1min可获得105～106cfu/μg效价，可满足质粒转化要求。该制品使用简单、运输、储存方便。

储存

RTS系列感受态为干粉形式，均可室温保存3天，长期保存-20°C（2年）。经Nano E.coli Transfection Reagent溶解后的感受态必须分装后，并于-60°C以下保存。溶解后的感受态细胞避免反复冻融，在-60°C以下可保存6个月。

使用方法

1. 从-20°C冰箱中取出Nano E.coli Transfection Reagent彻底融化，放置于冰上。取300 μl Nano E.coli Transfection Reagent加入到一支冻干感受态细胞中，并分装到10支1.5 ml EP管中（每支30 μl），于-60°C以下保存（或立即使用）。

2. 将10～100 ng质粒DNA（不可使用连接产物、不可使用氯霉素筛选标记质粒）加入到分装的感受态细胞中，轻弹EP管（或枪头轻轻吹打），置于冰上15min。

3. 置于42°C热激1 min后，迅速置于冰上急冷2 min。

4. 热激完毕后，向上述感受态细胞中加入450 μL不含抗生素的SOC（或LB）培养基，37°C振荡（225 rpm）培养60 min。使质粒上抗性标记基因表达，菌体复苏。

5. 取200 μl复苏菌液涂布到含相应抗生素的LB琼脂平板表面。（含相应质粒抗生素和20 μg/ml氯霉素）

6. 将平板置于37 °C培养，12~18小时后可出现菌落。

7. 挑选生长良好的菌落，接入LB培养基（含相应质粒抗生素，20 μg/ml氯霉素），37℃剧烈振荡培养过夜。

8. 1/50比例接入新的LB培养基（含相应质粒抗生素，20 μg/ml氯霉素，0.5 mg/ml L-阿拉伯糖）37 ℃剧烈振荡培养至菌体密度OD600约0.3（约2h）。

9. 加入终浓度2 ng/ml四环素（诱导chaprone伴侣蛋白表达），37℃剧烈振荡培养至OD600约0.5（约2~4h）。

10. 加入适量IPTG(0.1-1 mM), 15℃振荡培养24h（培养摇床无法制冷条件下，室温诱导8～12h）。

11. 4,000 rpm室温离心15 min，收集细胞，进行蛋白表达和可溶性表达分析。

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应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

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应用实例3：采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2，结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性，而60℃条件下1min内酶活完全释放，恢复100%活性