土壤木质素过氧化物酶(S-Lip)活性检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
规格:50T/24S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
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溶液的配制:
1. 试剂二:临用前取1瓶加入2.5 mL乙醇溶解,用不完的试剂可以2-8℃保存2周,实验前再将试剂二用乙醇稀释10倍备用,用多少配多少。(1瓶粉剂溶解后可做50T,为了延长使用时间,此产品多给1瓶粉剂)
2. 试剂三:使用前请离心再用。取 2μL 试剂三加入 1mL 蒸馏水充分混合备用(约 20T 的量),现用现配,也可根据样本量按比例配制。
产品说明:
木质素过氧化物酶(EC1.11.1.14)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,属于木质素降解酶系,在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制等方面具有较大的应用潜力。木质素过氧化物酶氧化藜芦醇生成藜芦醛,在310nm处有特征吸收峰。
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注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
天平、低温离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、移液器,水浴锅、震荡仪、甲苯(不允许快递)、乙醇(不允许快递)、30-50目筛、研钵、蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干,过 30~50 目筛。
二、测定步骤
1. 紫外分光光度计预热30min以上,波长调至310nm,蒸馏水调零。
2. 样本测定(1.5mL EP管):
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![image 2022060204560563320](http://bioesn.net/upload/ueditor/image/20220602/2022060204560563320.png)
三、酶活计算公式
酶活性定义:每克土壤每分钟生成1nmol 藜芦醛所需的酶量为一个酶活力单位。
S-LiP 活性(U/g 土样)=ΔA÷(ε×d) ×109×V反总÷W÷T=1.792×ΔA÷W
ε:藜芦醛摩尔消光系数:9300L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,1mL=0.001L;W:土
样质量,g;T:反应时间,60min;109:单位换算系数,1mol=109nmol。
实验实例:
1、 称取两份 0.1g 土样于 1.5mLEP 管中,分别为测定管及对照管,之后按照测定步骤操作,测得计算 ΔA=A 测定
管-A 对照管=1.393-1.012=0.381,按土样质量计算酶活得:
S-LiP 活性(U/g 土样)=1.792×ΔA÷W=1.792×0.381÷0.1=6.828 U/g 土样。
2、 称取两份 0.1g 三叶草土样于 1.5mLEP 管中,分别为测定管及对照管,之后按照测定步骤操作,测得计算 ΔA=A
测定管-A 对照管=1.296-0.963=0.333,按土样质量计算酶活得:
S-LiP 活性(U/g 土样)=1.792×ΔA÷W=1.792×0.333÷0.1=5.967 U/g 土样。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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