人卵巢癌腺癌细胞

平台编号：Bio-132187

一、细胞基本属性

细胞名称 NIH:OVCAR-8人卵巢癌腺癌细胞（STR鉴定正确）

种属来源 人

年龄性别 卵巢

生长特性 贴壁生长

细胞形态 上皮样细胞

细胞代数 10代以内 

生物安全等级 1

细胞规格 1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装

支原体检测 无

保藏机构 ATCC

培养基 1640 +10%FBS

培养条件 气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃

冻存条件 无血清冻存液，液氮储存

运输方式 复苏发货（T25瓶免运输费用）/  冻存发货（需加干冰运输费用）

供应限制 仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

特别说明 以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主

  二、细胞培养操作

收货方式 T25瓶 冻存管

收货处理 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37度培养箱放置2-4h，以便稳定细胞状态 收到细胞后，需立即转入液氮冻存或直接复苏

传代密度 细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养 第二天换液并检查细胞密度

传代比例         首次传代建议1：2传代        

                  1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿 一管细胞建议接种到6cm培养皿或者T25瓶

传代方法

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。          

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。          

c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

注意事项

1.运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 

2.因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。

1.收货时若发现干冰化完，检查冻存管是否融化，若已融化需直接离心细胞接种观察，若未融化可以将细胞按正常步骤保存；        

2.为保证细胞的高存活率，收到产品后，请立即解冻复苏细胞。

到货须知

1.收到细胞后，首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发，细胞是否解冻，若有上述现象发生请及时和我们联系。          

2.静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照（当天以及第 2,3 天请拍照），记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据)；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。

  三、细胞冻存操作

冻存液配方 无血清冻存液，液氮储存

细胞密度 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例

冻存方法 a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。        

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5x106~1x107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。        

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

注意事项 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案