人胃癌细胞荧光素酶标记

细胞介绍

NCI-N87细胞表达表面糖蛋白癌胚抗原(CEA)和TAG 72, 并且没有左旋多巴胺脱羧酶(DDC)活性。它们的血管活性的肠肽(VIP)受体活性极低并缺乏胃泌激素受体。 它们表达蕈毒碱胆碱受体。没有证据表明存在N-myc, L-myc, myb和EGF受体基因的重组。这个细胞株表达的c-myc和c-erb-B 2 RNA水平与其它细胞株相当。以下基因不表达: N-myc, L-myc, c-cis, IGF-2, 或胃泌激素释放肽。据报道NCI-N87 细胞的植板率为4.3%。

该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。

细胞特性

1） 来源：胃癌，肝转移

2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长

3） 含量：>1x106  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用。

运输和保存

干冰运输及复苏好存活细胞

（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

细胞接收后的处理

1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。

一．培养基及培养冻存条件准备

1) 准备1640 基础培养基                   87 %

优质胎牛血清                       10 %

P/S青霉素-链霉素            1%

GlutaMAX-1谷氨酰胺     

Sodium Pyruvate丙酮酸钠            1%

注意事项：该细胞贴壁较慢，且生长缓慢，建议复苏、传代后让细胞贴壁48h后再进行后续实验操作。细胞最初将附着形成小岛状，然后在这些密集的斑块中增殖，因此很难正确估计汇合度。避免细胞过密生长，及时更换新鲜培养基，以免培养基的pH受到不利影响。该细胞培养时，在培养基中会有一些漂浮细胞和碎片，并且在该细胞中可能会观察到较大的“囊泡”和颗粒状外观，是正常现象。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。