小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14

                           小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14 百欧博伟生物

小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14是从克隆的但是表型各异的MC3T3-E1细胞系中分离出一系列亚克隆。从含抗坏血酸培养基生长的成骨细胞中选择高或低成骨细胞分化、矿化的亚克隆。

一、细胞简介

平台编号：Bio-51634

规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶

细胞信息：MC3T3-E1 Subclone 14

细胞名称：MC3T3-E1 Subclone 14 (小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14) (种属鉴定正确)

细胞别称：MC3T3-E1 SUBCLONE 14

种属：小鼠

年龄（性别）：新生

组织来源：颅顶骨

生长特性：贴壁细胞

细胞形态：成纤维细胞样

背景描述：从克隆的但是表型各异的MC3T3-E1细胞系中分离出一系列亚克隆，从含抗坏血酸培养基生长的成骨细胞中选择高或低成骨细胞分化、矿化的亚克隆。MC3T3-E1 Subclone 4和MC3T3-E1 Subclone 14在抗坏血酸和3-4mM无机磷酸盐中生长表现出高水平的成骨细胞分化。它们10天后形成一个矿化良好的细胞外基质(ECM)。MC3T3-E1 Subclone 24和MC3T3-E1 Subclone 30在抗坏血酸中生长表现出很差的成骨细胞分化，不形成ECM，可以作为MC3T3-E1 Subclone 4和MC3T3-E1 Subclone 14的阴性对照。矿化的亚克隆选择的表达作为成骨细胞标记的mRNA及唾液酸糖蛋白(BSP)、骨钙素(OCN)和甲状旁腺激素/甲状旁腺激素相关蛋白受体的mRNA。高或者低的分化潜能的亚克隆在培养中生产出相似数量的胶原质，表达可比较的基本水平的mRNA编码Osf2/Cbfa1，一种成骨细胞相关转录因子。植入免疫缺陷小鼠以后，高分化性的亚克隆形成与骨类似的形成小骨的编织骨，低分化细胞只是产生纤维组织。这些细胞系是研究体外成骨细胞分化的好模型，尤其是ECM信号。它们和原代培养颅顶成骨细胞的行为类似。

生物安全等级：1

生长培养基：MEMα＋10% FBS＋1% P/S

推荐传代比例：1:3-1:4

推荐换液频率：2~3次/周

冻存条件：冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO温度：液氮

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃

致瘤性：Yes, in immunodeficient mice (forms bone-like ossicles).

用途：(种属鉴定正确)

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、细胞特性

1）来源：小鼠 颅顶骨

2）形态：成纤维细胞，贴壁生长

3）含量：>1x106 细胞数

4）规格：T25 瓶或者 1mL 冻存管包装

5) 用途：仅供科研使用。

三、细胞的运输和保存

干冰运输及复苏好存活细胞：

（1）1mL 冻存管包装干冰运输，收到后-80 度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

（2）T25 瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

四、细胞接收后的处理方法

1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置约 2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在 4 或 5X 显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各 2-3 张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

3）贴壁细胞：细胞在 37℃培养箱中放置 2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在 60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基 6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达 70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议 T25 培养瓶 1：2 传代。

五、细胞培养步骤

1、培养基及培养冻存条件准备：

1）准备 MEMα基础培养基 89%

优质胎牛血清 10%

NaHCO3 1.5g/L

肌醇 43.2mg/L

叶酸 8.82mg/L

β-巯基乙醇 7.8mg/L

P/S 青霉素-链霉素 1%

2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37 摄氏度，培养箱湿度为 70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

2、细胞处理：

1）冻存细胞的复苏：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含 4-6mL 完全培养基的离心管中混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含 6-8ml 完全培养基的培养瓶（或皿）中 37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前 3 代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2、加入 0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA 于培养瓶中（T25 瓶 1-2mL，T75 瓶 2-3mL），置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入 3-4ml 含 10%FBS 的培养基来终止消化。

3、轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 3-5min，弃去上清液，补加 1-2mL培养液后吹匀。

4、将细胞悬液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6-8ml 按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按 1:2~1:5 的比例进行。

下面 T25 瓶为例；

1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为 1×106~1×107个活细胞/ml.

2、1000rpm 离心 3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml 冻存液含 1×106~1×107 个活细胞/ml 分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80 度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

六、注意事项

1、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2、建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

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