Kasumi-1（人急性原粒细胞白血病细胞）

                    Kasumi-1（人急性原粒细胞白血病细胞）百欧博伟生物

一、产品信息

平台编号：Bio-83980

规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶

细胞信息：Kasumi-1

细胞名称：Kasumi-1（人急性原粒细胞白血病细胞）

种属：人

年龄（性别）：男；7岁

组织来源：外周血，急性原粒细胞白血病

生长特性：悬浮

细胞形态：原粒细胞

生长培养基：RPMI-1640＋20% FBS＋1% P/S

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃

用途：(STR鉴定正确)

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、细胞简介

Kasumi-1细胞具有人急性淋巴白血病细胞的典型特征，是研究人急性淋巴白血病的极佳材料。Kasumi-1细胞是一个带有8：21号染色体转位的白血病细胞株，这个转位使得AML1基因和ETO(或称MTG8)基因串联，使融合基因AML1-ETO(也称作AML1-MTG或RUNX1-CBF2T1)的表达升高，因而细胞产生嵌合的AML1-ETO蛋白。这个蛋白下调CEBPA mRNA、蛋白和DNA的结合活性，而这种结合对粒性白细胞的分化是极端重要的。Kasumi-1细胞建立于一位急性白血病患者的外周血，Kasumi-1细胞髓过氧化物酶阳性，显示其髓性成熟的形态。增生试验显示，培养的Kasumi-1细胞对IL-3、IL-6、G-CSF(粒细胞集落刺激因子)、GM-CS(粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)有响应，但对IL-1和IL-5没有响应。在体外液体培养中分别加入二甲亚砜、G-CSF、IL-5，也没有观察到粒性或嗜酸性细胞的成熟。Kasumi-1细胞培养过程中，加入佛波酯可以看到诱导出的巨噬细胞样细胞。

三、细胞培养的优点

1、研究的对象是活细胞

在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。

2、研究条件可以人为控制

pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。

3、研究的样本可以达到比较均一性通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用*化等方法使细胞达到纯化。

4、研究内容便于观察、检测和记录

采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备  记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。

5、研究的范围比较广泛

应用的学科领域较为宽广,如细胞学、免疫学、学、生物化学、遗传学、分子生物学等；适用的对象范围广,从低等动物到高等动物,一种动物的不同年龄阶段以及不同组织,都可进行有针对性的研究。

6、研究的费用相对较经济可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。

四、操作流程

1、主要试剂与仪器：倒置相差显微镜,co2孵箱。

2、细胞的复苏培养传代及冻存：

（1）细胞的复苏培养：从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。

（2）细胞传代：原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%胰酶消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。

3、细胞形态的观察：在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。

4、细胞的计数：常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。

5、细胞的贴壁率：指数生长期的细胞,以0.25%胰酶消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100%,计算贴壁率。

6、生长曲线：取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。

五、细胞培养操作步骤

1、用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布；

2、将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片)；

3、在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4、将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中；

5、将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

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