DYR0100人诱导型多能干细胞

                        DYR0100人诱导型多能干细胞 百欧博伟生物

细胞简介

平台编号：Bio-54178

规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶

细胞信息：DYR1

细胞名称：DYR0100人诱导型多能干细胞

描述：将人包皮细胞诱导成iPS细胞，每支细胞可复苏至一个T25，通过重编程转录因子为OCT4、SOX2、KLF4、MYC诱导建立的iPS细胞。培养时无需饲养层细胞。

动物种别：人

性别：男

组织来源：新生儿包皮细胞

形态：球形克隆

培养基和添加剂：Pluripotent Stem Cell SFM XF/FF (原装进口培养基ATCC ACS-3002TM) 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度

供应限制：A。仅供研究之用。

提供形式：复苏状态

用途：研究

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

复苏：

将人iPS细胞冻存管从液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超净台内用75%酒精擦拭冻存管旋口处及外壁，防止污染。

用1 ml移液器轻柔地将冻存管内液体转移到15 ml离心管中。

在上述离心管内逐滴加入温育好的4 ml hiPS无饲养层完全培养液，一边加一边晃动离心管。

离心1000 rpm，5 min。

将上清丢弃，轻弹离心管底部使细胞团松散。

加入1ml含有ROCK Inhibitor Y27632的hiPS无饲养层完全培养液，非常轻柔地吹打2-3次。不可过度吹打，避免细胞被分散成单细胞。

将铺过基质胶的培养皿从培养箱取出，吸掉多余的液体，加入含有ROCK Inhibitor Y27632的培养液3 ml。

将第6步中离心管内的细胞悬液转移到皿内，使细胞铺散均匀，置37℃，5% CO2 培养箱内培养。

24h后，换新鲜的不加ROCK Inhibitor Y27632的hiPS无饲养层完全培养液。

每天换液。ROCK Inhibitor Y27632仅在复苏和传代时添加（1:1000），日常换液不用添加。

传代：

将所需的所有试剂均在37℃水浴温热。

将培养皿内的培养液弃掉，用DPBS漂洗2遍，弃掉。

加入2 ml hiPS无饲养层消化液。

37℃孵育10-15分钟，期间注意观察，直到每个克隆的边缘都向中心卷起。

将hiPS无饲养层消化液吸掉，轻轻地加入4ml DMEM:F12培养液并晃动培养皿，吸掉。

加入2 ml含有ROCK Inhibitor Y27632的培养液，用1 ml移液器吹打皿底或用无菌的细胞刮使细胞脱落。避免吹打过度。

将细胞转移至15 ml离心管，并再次加入3 ml含有ROCK Inhibitor Y27632的培养液将培养皿冲洗一次，收集到离心管内。

离心1000 rpm，5 min。

将上清丢弃，轻弹离心管底部使细胞团松散。

加入2 ml含有ROCK Inhibitor Y27632的hiPS无饲养层完全培养液，非常轻柔地吹打2-3次。不可过度吹打，避免细胞被分散成单细胞。

将细胞分到预铺了基质胶的培养皿内培养。

每天换液，4-5天传代一次，传代比例为1:2-1:6。当出现下列任何一种情况时，需要进行传代：细胞汇合度达到90%；干细胞克隆过大，中央细胞生长不良；克隆有开始分化的迹象。

冷冻：

参照传代步骤1-9，hiPS无饲养层冻存液4℃保存，不需要预热。

在离心管内加入2 ml细胞冻存液，轻轻吹打，避免过度吹打。

将细胞悬液分装到贴好标签的冻存管内，每管0.5 ml。

将冻存管放入程序降温仪，置-80℃。

24h后，冻存管转入液氮保存。

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