里氏木霉 ACCC 30590 百欧博伟生物
丝状真菌里氏木霉(Trichodermareesei)是多细胞的真核微生物,红褐肉座菌(Hypocrea jecorina)的无性型,隶属于丛梗孢目(Moniliales)木霉属(Trichoderma)。其作为工业菌株用于生产分解不同植物材料的酶类,包括纤维素酶、半纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶等,已有多年历史。
一、菌种简介
平台编号:Bio-62587
提供形式:冻干物
拉丁属名:Trichorderma Reesei
中文名称:里氏木霉
属名:Trichorderma
种名加词:reesei
其它中心编号:=ACCC 30590=DSM 768=ATCC 13631
来源历史:←中国农业微生物菌种保藏管理中心←DSMZ
收藏时间:2013.12.20
资源归类编码:15151913121
模式菌株:模式菌株
主要用途:分类;研究;分析检测
具体用途:产纤维素酶;塑料真菌抗性检测;产内切葡聚糖酶;产生葡聚糖1,3-β-葡糖苷酶;β-D-1,3-葡聚糖酶;外切-1,3-β-葡聚糖酶和外切-1,3-β-葡糖苷;产生D-葡萄糖;酶水解纤维素产葡萄糖;细胞
生物危害程度:四类
致病对象:无
分离基物:棉帆布遮布
培养基:马铃薯提取液 1.0L,葡萄糖 20.0g,琼脂 15.0g,pH自然。[注] 马铃薯提取液:取去皮马铃薯200g,切成小块,加水1.0L煮沸30min,滤去马铃薯块,将滤液补足至1.0L。
培养温度:24℃
资源保藏类型:培养物
保存方法:-80℃冰箱冻结法;真空冷冻干燥法
实物状态:有实物
共享方式:公益性共享;资源纯交易性共享;合作研究共享;资源交换性共享
用途:分类;研究;分析检测;产纤维素酶;塑料真菌抗性检测;产内切葡聚糖酶;产生葡聚糖1,3-Β-葡糖苷酶;Β-D-1,3-葡聚糖酶;外切-1,3-Β-葡聚糖酶和外切-1,3-Β-葡糖苷;产生D-葡萄糖;酶水解纤维素产葡萄糖;细胞
注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准)
二、菌落特点
里氏木霉,菌落呈广铺的棉絮状,起初为白色致密的平坦菌丝,而后边缘出现浅绿的产孢子丛束区,反面无色。分生孢子梗菌丝的短侧枝,透明,多分枝;小梗瓶形,中部弯曲;分生孢子椭圆形或长形,单细胞,透明,无色,壁光滑,成堆时绿色。
三、基因表达与功能分析
里氏木霉所产生的一种主要的纤维酶一纤维二糖水解酶I(cellobiohydrolase1),由单拷贝基因编码,其产量可达里氏木霉胞外分泌性蛋白总量的50%[1]。由此可见,cbh1启动子是很强的启动子。因此在对里氏木霉的遗传改造中,常利用cbh1的启动子与终止子序列构建载体,并利用cbh1的前导肽序列引导重组蛋白进行分泌性表达。里氏木霉具有极好的合成蛋白和分泌蛋白的能力;并具有真核的分泌机制,很可能还具有与哺乳动物系统相似的蛋白修饰性能,如:高甘露糖型和N-糖基化等。由于里氏木霉具有以上优良性能,再加之其工业化规模发酵条件已比较成熟,这些都促进了对里氏木霉的遗传改造,为同源或异源分泌性蛋白的产生提供了一条行之有效的途径。
里氏木霉不仅具有适于蛋白生产的诸多优点,且对人没有毒性,在产酶条件下也不产生真菌毒素和抗生素。近年来的实践表明,经过基因工程手术改造的里氏木霉重组菌株是安全无害的。
四、菌种的培养
1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。
2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。
3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。
4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。
5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。
6、如果有些生产菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。
五、使用范围
(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,酿酒酵母菌组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。
(2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。
(3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。
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