RT4 (人膀胱移行细胞乳头瘤细胞)

         RT4 (人膀胱移行细胞乳头瘤细胞) 的说明及培养！

一、背景

膀胱癌是泌尿科常见的恶性肿瘤之一，居中国男性泌尿生殖系恶性肿瘤发病率第1位，其病死率位居恶性肿瘤的第8位，且呈上升趋势。膀胱癌易复发、侵袭及转移，新诊断的膀胱癌患者中约5%的患者已发生远处转移。关于其侵袭和转移机制目前尚未明确。近年来，虽然在膀胱癌的临床诊断和治疗方面有所进展，但由于缺少理想的诊断和预后标志物，其预后仍不理想。为了研究膀胱癌的发生、侵袭、转移机制，一般选用人膀胱癌RT4细胞进行系列的科学研究。

二、RT4细胞的简介

RT4细胞的组织来源是患有移行细胞乳头瘤的人膀胱器官。呈上皮细胞样，支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性，一般采用T25 瓶或者1mL冻存管包装。

三、培养步骤

1、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2 培养瓶中的培养液，用PBS 清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml 完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml 离心管中，1000rpm 离心5min；

3）弃上清，沉淀细胞用1-2ml 完全培养基重悬，然后按1:2 比例进行分瓶传代，最后放入37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养；

2、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2 培养瓶中的培养液，用PBS 清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml 离心管中，1000rpm 离心5min；

3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。

3、细胞复苏：

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2）将冻存管中的细胞移至含6ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm 离心5min；

3）弃上清，沉淀用6ml 完全培养基重悬，接种25cm2 培养瓶，于37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养。

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