A549人非小细胞肺癌细胞使用说明书!
一、细胞简介
平台编号:bio-72958
规格:5×10?cells/T25培养瓶
拉丁属名:A549
细胞名称:A549(人非小细胞肺癌细胞)
种属:人
年龄(性别):男;58岁
组织来源:肺癌
生长特性:贴壁
细胞形态:上皮细胞样
背景描述:A549细胞是由D·J·Griad通过肺癌组织移植培养建系,源自于一位58岁白人男性;A549能通过胞苷二磷酸胆碱途径合成含有高含量不饱和脂肪酸的卵磷脂。
生长培养基:Ham's F-12K(货号:PM150910)+10% FBS(货号:164210-500)+1% P/S(货号:PB180120)
推荐传代比例:1:3-1:4
推荐换液频率:2~3次/周
倍增时间:~22 hours
冻存条件:冻存液:55% 培养基+40%FBS+5%DMSO 温度:液氮
培养条件:气相:空气,95%;CO2,5% 温度:37℃
抗原表达情况:The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining.
保藏机构:ATCC; CCL-185 ATCC; CRM-CCL-185 ATCC; CRL-7909 BCRC; 60074 BCRJ; 0033 DSMZ; ACC-107 ECACC; 86012804
说明书下载:A549.pdf
二、细胞传代
1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒,将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲,.然后置于无菌操作台,打开瓶口,将其中的培养液去掉,再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代,一般2到3天换一次液;
2.待细胞长满瓶底面积80%-90%,需要对其进行传代,传代比例为1:3到1:6;
3传代步骤:将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热,倒掉培养瓶中的培养基,往培养瓶中加入3-5 ml PBS,轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶,置于37°孵育消化(第一次消化需时常取出置于显微镜下观察,以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为z佳消化时间,记录最佳消化时间,以便于下次消化),消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞,使之完全脱落,然后收集细胞悬液,1200rpm离心3min,弃上清,加入完全培养基重悬细胞,进行传代。
三、细胞保存
冻存条件:80%完全培养基+10%FBS+10%DMSO
(备注:建议使用本公司的冷冻液(H-W-100),用4度保存的冷冻液直接重悬细胞,不能预热后使用。)
保存条件:液氮存储
四、供应限制:仅供研究之用。
五、常见问题及解决方案
1.培养瓶有破裂,培养液有漏液:细胞极大可能会污染,所以我们会及时安排帮老师解决。
2.收到细胞后尽快更换为含 10%血清的新鲜培养基,如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基,请在原瓶培养基中额外添加 10%的血清(原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过 72 小时)
3.细胞漂浮:培养瓶不开封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余漂浮的细胞可以去掉,留8-10ml培养液培养观察,细胞生长至汇合度80%,进行消化传代;如细胞还是不贴壁,将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养液继续培养,中间注意观察,我们的技术人员会一直跟踪指导,直到问题解决。
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