小鼠B淋巴细胞的处理方法与应用！

         小鼠B淋巴细胞的处理方法与应用！

一、背景

小鼠B淋巴细胞亦可简称小鼠B细胞，来源于骨髓的多能干细胞。B淋巴细胞的祖细胞存在于胎肝（胚胎小鼠14天或通顺儿8-9周）的造血细胞岛（island of hematopoietic cells）中，此后B淋巴细胞的产生和分化场所逐渐被骨髓所代替。成熟的B细胞主要定居于淋巴结皮质浅层的淋巴小结和脾脏的红髓和白髓的淋巴小结内。B细胞在抗原刺激下可分化为浆细胞，浆细胞可合成和分泌抗体（免疫球蛋白），主要执行机体的体液免疫（humoralimmunity）。

B细胞在骨髓内分化各阶段的主要变化为免疫球蛋白基因的重排和膜表面标志的表达。B细胞在发育分化过程中，同样也经历选择作用，以除去非功能性基因重排B细胞和自身反应性B细胞，形成周围成熟的B细胞库。B细胞表面有多种膜表面分子，识别抗原、与免疫细胞和免疫分子相互作用，也是分离和鉴别B细胞的重要依据。B细胞表面分子主要有白细胞分化抗原、MHC以及多种膜表面受体。

二、细胞特性

1)组织来源于实验动物的正常肺组织。

2)细胞鉴定：肺表面活性蛋白A(SP-A)免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式：铺路石状细胞，不规则细胞，贴壁培养。

三、收到常温细胞后如何处理

1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与我司联系。

2、用 75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养 2-4 小时，以便稳定细胞状态。

3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。

4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。

5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过 80%，可正常传代；若未超过 80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留 5ml 左右继续培养，直至细胞密度达 80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。

6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至 50ml 无菌离心管内，1200rpm 离心 5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入 5ml 培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过 80%，可将细胞悬液分至 2 个细胞培养瓶内培养，补加培养基至 5ml；若细胞密度未超过 80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达 80%左右时再进行传代操作。

四、小鼠B淋巴细胞的应用

用于B淋巴细胞刺激因子参与胶原性关节炎小鼠T、B淋巴细胞相互作用及TACI-Ig对其的影响研究：

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是T、B淋巴细胞参与的系统性自身免疫病。B淋巴细胞对抗原的应答及抗体的产生需要T淋巴细胞与B淋巴细胞间相互作用。B淋巴细胞既是辅助性T细胞(helper T cell,Th)辅助的对象,又是T淋巴细胞活化的抗原呈递细胞(antigen presenting cell,APC)。T、B淋巴细胞的激活需要双信号系统,第一信号为Ⅱ型主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex classⅡ,MHCⅡ)分子和TCR/BCR组成的复合物,第二信号为共刺激分子,包括CD28-B7分子和CD40-CD40配体(CD40ligand,CD40L)分子。

CD28-B7主要与T淋巴细胞活化、增殖及凋亡有关,CD40-CD40L主要与B淋巴细胞活化、增殖及凋亡有关。B淋巴细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLyS)对B淋巴细胞的成熟和存活起重要作用。BLyS是否参与T、B淋巴细胞间相互作用,如果参与,那么是否通过CD28-B7、CD40-CD40L共刺激分子来调节T、B淋巴细胞间相互作用,目前尚不清楚。BLyS受体TACI融合蛋白(TACI-immunoglobulin,TACI-Ig)是由TACI受体的胞外部分和人免疫球蛋白IgG的Fc段连接而成,它能竞争性地与BLyS结合,阻断BLyS所介导的B淋巴细胞激活对T淋巴细胞的影响。

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