pDR195毕赤酵母质粒
基本信息
启动子: PMA1 promoter
复制子: pUC ori
终止子: ADH1 terminator
质粒分类: 酵母细胞质粒;酵母表达质粒;毕赤酵母质粒
质粒大小: 6305bp
原核抗性: 氨苄青霉素Amp
筛选标记: URA3
克隆菌株: 大肠杆菌DH5α
培养条件: 37℃,有氧,LB
表达宿主: 毕赤酵母
5'测序引物: PMA1-F:CGTTAATAATTAATTAATTGG
3'测序引物: ADH1ter-R:GAGTCACTTTAAAATTTGTATACAC
备注: 高拷贝
质粒简介
pDR195质粒是一个毕赤酵母表达载体,PMA1启动子驱动目的基因的表达
质粒图谱![pDR195.png pDR195.png](https://img1.17img.cn/17img/images/201908/uepic/55059637-74cc-44c1-b04f-f4ea13543920.jpg)
pDR195毕赤酵母质粒使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pDR195毕赤酵母质粒注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。
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