pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒表达质粒

pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒表达质粒

基本信息

启动子: CMV

复制子: pUC ori

终止子: WPRE，3’LTR

质粒分类: 病毒系列，慢病毒克隆载体

质粒大小: 8204bp

原核抗性: Amp

克隆菌株: Stbl3

培养条件: 37℃，有氧 LB

表达宿主: 哺乳细胞

诱导方式: 无须诱导，瞬时表达

5'测序引物: CMV-F：CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG

3'测序引物: 根据序列设计引物

质粒简介

    plvx-ires-zsgreen1是HIV-1，慢病毒表达载体，让你在几乎任何哺乳动物细胞类型的兴趣和zsgreen1蛋白同时表达，包括原代细胞。zsgreen1是人类密码子优化的变种的珊瑚礁Zoanthus属绿色荧光蛋白，ZsGreen。向量表示的两种蛋白双顺反子mRNA的转录，使zsgreen1作为转导效率的一个指标，用流式细胞仪选择标记。

   双顺反子的转录表达的组成性激活人类巨细胞病毒立即早期启动子驱动（CMV）位于上游的MCS。脑心肌炎病毒（EMCV）内部核糖体进入位点（IRES），位于MCS和zsgreen1之间，有利于在IRES / zsgreen1结内部起始位点zsgreen1帽独立的翻译。

   plvx-ires-zsgreen1包含所有用于生产的必要的复制能力的慢病毒病毒处理的元素，以及元素来提高病毒滴度，外源基因的表达水平，和整体的向量函数。土拨鼠肝炎病毒转录后调节元件（WPRE）促进RNA处理事件和增强病毒RNA核出口，导致增加病毒滴度包装细胞。此外，载体包括Rev应答元件（RRE），从而进一步增加病毒滴度提高拼接的病毒RNA转运出细胞核。最后，plvx-ires-zsgreen1还包含一个中央聚嘌呤道/中央终止序列（CPPT / CTS）。在靶细胞感染过程中，该元素创建一个中央的DNA瓣，增加了病毒基因组的核导入，从而在改进的矢量集成和更有效的转导。载体还包含一个复制市局起源和大肠杆菌氨苄青霉素抗性基因（Ampr）在细菌繁殖和选择。

质粒图谱

pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒表达质粒使用说明：

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；

     4、42℃热激90s，再冰浴2min；

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；

     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。

pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒表达质粒注意事项：

      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。