pVSV-G逆毒包装质粒
基本信息
启动子: CMV,T7
复制子: pUC ori,SV40 ori
终止子: β-globin poly(A) signal
质粒分类: 病毒系列,逆转录病毒包装载体
质粒大小: 6363bp
质粒标签: VSV-G
原核抗性: Amp
克隆菌株: Stbl3
培养条件: 37℃,有氧 LB
表达宿主: 哺乳细胞
诱导方式: 无须诱导,瞬时表达
5'测序引物: CMV-F:CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG
3'测序引物: 根据序列设计引物
质粒简介
pVSV-G表示G蛋白的水泡性口炎病毒(VSV-G)的控制下CMV立即早期启动子。VSV-G用于假Moloney Murine Leukenia病毒(MMLV)-介导病毒进入通过逆转录病毒载体VSV-G与磷脂。靶细胞膜的组成部分,并促进病毒和细胞膜的融合。利用不需要的细胞表面受体,可以作为一个替代病毒包膜蛋白。pVSV-G向量包括静脉输液,以提高合成的内含子的mRNA的稳定性,复制和氨苄青霉素抵抗细菌的Col E1起源(Ampr)基因的传播和细菌中抗生素的选择。
![pVSV-G1.png pVSV-G1.png](https://img1.17img.cn/17img/images/201908/uepic/2453f51f-fc42-4266-ab8c-7d828f95ed9a.jpg)
质粒图谱![pVSV-G.png pVSV-G.png](https://img1.17img.cn/17img/images/201908/uepic/36a9f729-bcb5-47df-aaf7-c1ff6889afa2.jpg)
pVSV-G逆毒包装质粒使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pVSV-G逆毒包装质粒注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。
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