pTXB1大肠表达质粒

pTXB1大肠表达质粒

基本信息

启动子: T7

复制子: M13 ori

质粒分类: 大肠杆菌载体；蛋白表达质粒

质粒大小: 6706bp

原核抗性: 氨苄青霉素Amp

克隆菌株: DH5α

培养条件: 37℃，有氧，LB

表达宿主: 大肠杆菌

培养条件: 37℃，有氧，LB

诱导方式: IPTG或乳糖及其类似物

备注: 温控表达质粒

质粒简介

pTXB1 contains a mini-intein from the Mycobacterium xenopi gyrA gene (Mxe GyrA intein; 198 amino acid residues)  that has been modified to undergo thiol-induced cleavage at its N-terminus (3,5). The vector allows for the purification of a target protein without any extra amino acids by cloning into the NdeI and SapI sites. The target protein is fused at its C-terminus to a self-cleavable intein tag (~28 kDa) that contains the chitin binding domain (CBD, 6 kDa) allowing for affinity purification of the fusion precursor on a chitin column.

质粒图谱

pTXB1大肠表达质粒使用说明：

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；

     4、42℃热激90s，再冰浴2min；

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；

     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。

pTXB1大肠表达质粒注意事项：

      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。