pGEX-4T-1大肠表达质粒
基本信息
别名: pGEX4T-1,pGEX4T1
启动子: Tac/laco promoter
复制子: ColE1 ori
质粒分类: 大肠杆菌载体;pGEX系列表达质粒
质粒大小: 4969bp
质粒标签: N-GST, N-thrombin
原核抗性: 氨苄青霉素Amp
克隆菌株: 大肠杆菌DH5α
培养条件: 37℃,有氧,LB
表达宿主: 大肠杆菌BL21 DE3
培养条件: 37℃,有氧,LB
诱导方式: IPTG或乳糖及其类似物
5'测序引物: pGEX5: GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG
3'测序引物: pGEX3: CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG
备注: 可用GST亲和柱纯化重组蛋白
质粒简介
pGEX-4T-1质粒是一个大肠杆菌表达载体,Tac强启动子可以驱动GST促溶标签和目的基因融合表达,LacI阻碍蛋白和Laco操作子使本质粒在没有加入IPTG之前禁止表达,防止其影响细菌生长。表达后的融合蛋白可用凝血酶蛋白酶切割,再过一次GST柱子即可清除掉GST标签。
质粒图谱![pGEX-4T-1.png pGEX-4T-1.png](https://img1.17img.cn/17img/images/201908/uepic/7281c005-f02f-427e-b1d8-2aa54a9ac6e6.jpg)
pGEX-4T-1大肠表达质粒使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pGEX-4T-1大肠表达质粒注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。
pGEX-4T-1大肠表达质粒信息由上海钦诚生物科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于pGEX-4T-1大肠表达质粒报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。除供应pGEX-4T-1大肠表达质粒外,上海钦诚生物科技有限公司还可为您提供KMS-12-PE 人多发性骨髓瘤细胞 QCH799、NCI-H2172 人非小细胞肺癌细胞 QCH810、T3M-4 人胰腺腺癌细胞 QCH797等产品,公司有专业的客户服务团队,是您值得信赖的合作伙伴。