大肠杆菌MDS42菌种

大肠杆菌MDS42菌种

英文名称：E.coli MDS42 Strain

运输：低温

保存：-80度

有效期：3年

货期：现货

其他：

产品介绍：

大肠杆菌 MSD42 表示 Multiple-deltion Series 42 号菌，它是用合成生

物学的方法，将属于 E.coli K-12 系的野生型 MG1655 菌株的非必需基因（如

IS、原噬菌体、假基因）、重组相关基因、转座相关基因、潜在毒力基因等进

行缩减，同时保留细菌生长和蛋白表达基因而得，它具有下列特点：

1. 故其基因组比野生型的大肠杆菌小 14.3%，少 663,316 个碱基，但仍然

能够在培养基上生长。

2. 其电转效率比正常大小的 E.coli 更高、极端条件下基因组更稳定，蛋白表

质粒更稳定。

3. 其关键基因型是 F-, ?-,recA1819,lacZM15,?flg,?fhuACDB,另外缺失

699 个基因（包括所有 IS 因子和原噬菌体）。缺失 fhuACDB 导致抗 T1

噬菌体感染，携带 lacZM15 可以进行蓝白斑筛选。详细基因型见下。

4. 本菌种没有任何抗菌素抗性

运输及保存 低温运输，-80℃保存，有效期一年。

自备试剂 YPD 培养基、山梨醇、超纯水等

使用方法 

质粒转化大肠杆菌MDS42菌种的方法有很多，如电转化、化学转化等。

根据实验方法的不同，用的试剂和培养基有所不同。本手册提供一个电转化方

法。

1. 挑取酵母单菌落，接种至含有 5 mL YPD 培养基的 50 mL 三角瓶中，

30℃，250-300 r/min 培养过夜；

2. 取 100-500 μL （≤1:100）的培养物接种至含有 50 mL 新鲜培养基的

200 mL 三角摇瓶中，28~30℃，250-300 r/min 培养过夜(约 20 小时)，

至 OD600 达到 1.3~1.5；

3. 将细胞培养物于 4℃，1500g 离心 5 分钟，用 50 mL 的冰预冷的无菌水

将菌体沉淀重悬；

4. 按步骤 3 离心，用 25 mL 的冰预冷的无菌水将菌体沉淀重悬；

5. 按步骤 3 离心，用 2-5 mL，1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬；

6. 按步骤 3 离心，用 160 μL 的冰预冷的 1M 的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬，

其终体积约为 240 uL；

7. 将 5~20 μg 的线性化 DNA 溶解在 5~10 μL TE 溶液中，与 80 μL 的上

述步骤 6 所得的菌体混匀，转至 0.2 cm 冰预冷的电转化杯中；

8. 将电转化杯冰浴 5 分钟；

9. 根据电转化仪提供的资料，参考其他文献及多次摸索，确定合适的电压、

电流、电容等参数，按优化的参数，进行电击（推荐：电压 1.5 kV ；电

容 25 μF ；电阻 200 Ω；电击时间为 4 ～10 msec）。

10. 电击完毕后，马上加入 1 mL 1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体混匀，转

至 1.5 mL 的 EP 管中，置于 30℃摇床低速培养 1 小时；

11. 将菌体悬液涂布于 MD 平板上，每 200~600 μL 涂布一块平板；

12. 将平板置于 30℃倒置培养，直至单个菌落出现（3-4 天）。