超敏型BCA法蛋白定量试剂盒
英文名称:Ultrasensitive BCA Protein Assay Kit
运输:常温
保存:常温
有效期:1年
货期:1-2天
其他:
产品介绍:
超敏型BCA法蛋白定量试剂盒
产品及特点
本产品是在 BCA 法蛋白定量试剂盒基础上改进的超敏蛋白定量试剂盒,尤其适合对低浓度的蛋白质溶液进行定量分析。它具有下列特点。
1. 超敏感,最低检测浓度为 0.5μg/mL。
2. 线性范围在 0.5~20μg/mL,尤其适用于低浓度的样品。
3. 对大多数离子型和非离子型去污剂不敏感,但对 Cu 的还原剂和螯合剂敏感。
4. 比 Lowry 法更加简单快捷,45 分钟内完成测定。
5. 试剂稳定,但工作液 1 天内有效。
6. 终产物稳定,检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。
7. 最短可以检测双肽,所以适合于分子量较小的蛋白质,而 Bradford 法需要一
定大小的蛋白质。
运输及保存 常温运输和保存,但 BSA 标准品需要低温运输,-20℃保存,有效期一年。
自备试剂 样品缓冲液
使用方法 1. 用合适的方法制备待测蛋白样品,并把蛋白质溶解在合适的样品缓冲液中。
本检测方法受待测样品中螯合剂和还原剂的影响,所以需确保蛋白溶液中,
EDTA 的终浓度不高于 10mM、二硫苏糖醇不高于 1mM、β-巯基乙醇不高
于 1mM,没有任何 EGTA。如果达不达上述要求,则需要稀释样品,使其
浓度降低到上述浓度之下。
2. 将本试剂盒提供的 BSA 标准品(2 mg/mL)10μL 和 490μL 自备的样品缓
冲液(用于溶解待测样品的溶液)混合,得到 500μL 浓度为 0.04μg/μL 的
BSA 工作液,放冰上待用,用于制备标准曲线,足够一次实验使用。此工作
液每次实验均需要新鲜配制。
3. 配制超敏 BCA 工作液:先计算一次检测所需 BSA 工作液的体积。如果有 N
个样品,每个样品只做一次重复,再加上 7 个标准曲线样品,则一次检测所
需 BSA 工作液的体积为: 0.15mL×(N+7)。一般多准备 10%的量。配
制时将溶液 A、溶液 B 和溶液 C 按 50:48:2 的比例混合到所需体积即可。
如果需要 9mL,则按 10mL 准备,则将 5 mL 溶液 A、4.8 mL 溶液 B、0.2mL
溶液 C 混合即可,所得溶液即超敏 BCA 工作液。
4. 取一块 96 孔板,按下表加入上步新鲜制备的 BSA 工作液、待测蛋白样品和
自备样品缓冲液:
5. 在每个孔中加入 1 倍体积(即 150 μL)的超敏 BCA 工作液并混匀。如果用
排枪加入并混匀则更好。也可把 96 孔板放在振荡器上振荡 30 秒混匀。
6. 60℃放置 1 小时。
7. 冷至室温,迅速在 562 nm 下比色测定其余样品的光吸收。如酶标仪没有
562 nm 的设定,可用接近的波长检测,如 570nm。测定操作最好在 10 分
钟内完成,否则化学反应还在继续进行,光吸收值每 10 分钟会升高 2.5%左
右。
8. 处理数据:将编号为 0 号的样品(对照)的读数从其余所有样品(包括 0 号
样品,其读数变成零)中扣除。
9. 制作标准曲线:以 0-7 号样品的 BSA 含量(单位 μg,见上表最右行)为横
坐标,以上一步得到的样品吸光值(扣除背景读数的)为纵坐标,绘出 BSA
的标准曲线。
10. 再将 N 个待测样品的吸光值(减去 0 号样品的读数后)标在标准曲线上,其
在横坐标上对应的蛋白含量(μg)就是待测样品中的蛋白质含量,除以样品
稀释液总体积(20μL),乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度(单位:
μg/μL)。
二:注意事项
11. 加工作液后也可以在室温放置 2 小时,或 60℃放置 30 分钟。超敏 BCA 法
测定蛋白浓度时,吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温
度升高而加快。所以,如果蛋白质浓度较低,可以改在 60℃孵育 60 分钟。
12. 待测样品浓度在 20~2000 μg/mL 范围时有较好的线性关系。
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