柱式土壤DNA提取试剂盒

柱式土壤DNA提取试剂盒

英文名称：Column Soil DNAOUT

运输：常温

保存：常温

有效期：1年

货期：1-2天

其他：

产品介绍：

柱式法提取土壤中的微生物DNA

产品及特点 

本产品是本公司土壤 DNA提取试剂盒的柱式升级产品，专门用于从

各种土壤样品和河海沉积物中提取高质量的 DNA 的试剂。跟土壤 DNA相比它

具有下列特点：

1. 去污染效果更好，得到的 DNA 可以直接作为 PCR 模板或酶切，不需要再进行

去腐殖酸处理。

2. 操作过程更加简单快速，整个操作只需要 10 多分钟，扩容性好。

3. 产量高，每克土壤一般可以提取到 5-50 ug DNA，片段长度在 20-50 Kb，

OD260/280 一般都在 1.8 以上。

4. 适合于各种土壤（包括河海沉积物）。

自备试剂 氯仿。

使用方法 1. 65℃预热柱式土壤 DNAout 溶液 A，待其沉淀溶化后充分混匀，取 0.5 mL 加

入到 1.5 mL 塑料离心管中并放置于 65℃待用。

2. 称取 0.1-0.3 g 的土壤，加入到装有预热的柱式土壤 DNAout 溶液 A 的离心管

中，震荡器上剧烈震荡 5-10 分钟。如果是扩量操作，可以使用更多土壤和较

大离心管。也可以将同一种土壤在较大离心管中震荡处理，然后再分到 1.5 mL

离心管中。注意:不论使用大的还是小的离心管，一定要让管底的土壤震荡起来。

3. 将离心管置于 65℃水浴中保温至少 5 分钟。

4. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟，将上清转移到一新离心管中(上清液一般呈

淡黄色或深棕色，实际颜色取决于腐殖酸的含量，上清液的体积一般为

300-400 μL)。

5. 在上清液中加入等体积的柱式土壤 DNAout 溶液 B，上下颠倒 30 秒充分混匀，

溶液将呈白色或淡黄色混浊状。

6. 将离心管冰浴至少 5 分钟。

7. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟，转移上清到新的 1.5 mL 离心管中，上清

液颜色将比第 4 步得到的上清的颜色稍淡，体积在 0.7 mL 左右。

注意：下面第 8-第 9 步的氯仿抽提操作可以省略，直接进入第 10 步，但 DNA 的

产量会低 50%左右，OD260/280 在 1.7-1.8。如果直接进入第 10 步，则转移的

溶液体积不要超过 0.6 mL，否则没有空间加 A 型通用上柱液。

8. 加入 0.2 mL 的氯仿(自备)，震荡器上充分振荡 30 秒混匀。注意:一定要让管底

的溶液震荡起来。

9. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟，小心转移上清到新离心管中。说明：离心

后两相交界面将有白色膜状物，其中有机相部分颜色较深，一般呈淡棕色。上

清的颜色取决于土壤中腐殖酸的含量。将上清转移到新的 1.5 mL 离心管时，

不要超过 0.6 mL，否则没有空间加溶液 C。如果有多余的可以弃之不用。

10. 加入 1.5 倍体积的 A 型通用上柱液，上下颠倒 30 秒混匀。

11. 分两次上柱（即先转移一半的混合液到离心吸附柱中，12000-15000 g 室温

离心半分钟，弃穿透液，然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中，12000-15000

g 室温离心半分钟，弃穿透液）。

12. 加 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000-15000 g 室温离心半分钟，弃

穿透液。

13. 再加 0.3 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000-15000 g 室温离心半分钟，

弃穿透液。增加一步洗涤能使后得到的 DNA 的纯度稍有提高。

14. 12000-15000 g 室温再离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液

会污染 DNA。

15. 将离心吸附柱转移到一新的 1.5 mL 塑料离心管中，加入 50uL DNA 洗脱液

2.0。

16. 室温放置离心吸附柱 1-2 分钟。

17. 12000-15000 g 室温离心半分钟，离心管中溶液即为提取到的 DNA 样品，可

以立即使用或存放于冰箱待用。

疑难解答 Q: 如何判断提取的ＤＮＡ没有腐植酸污染？

A：方法一是目测法，即看得到的溶液是否无色。如果呈淡棕黑色或淡黄色，说明可

能是少量残留的未除尽的腐植酸。方法二是检测大光吸收。注意：有腐植酸污

染并不表示 DNA 不能使用，有的腐殖酸并不抑制 PCR 扩增。

Q: 腐殖酸的大吸收波长是多少？

A：腐植酸（humic acid）是一大类呈棕黑色或黑色的物质，其结构千差万别，土

壤中腐殖酸的组成和特点随土壤不同而不同，所以其大吸收波长也各不相同，

有的土壤的腐殖酸在 260 nm 有大吸收（见 Appl.Environ. Microbiol., 63：

4993，1997），有的则在 340 nm。所以用特定的波长测定 OD 值时波长的选

定要根据土壤而决定。Sigma, Fluke 等公司出售的腐植酸产品成分一般比较简

单，其大吸收波长不能推广到成分更为复杂的土壤腐殖酸样品。

Q: 是否腐植酸都会抑制后续的 DNA 反应？

A：否，因为腐植酸是一大类物质的统称，他们的结构和特性各不相同，所以是否对

后续反应有影响好通过实验来验证。如果用提取的 DNA 溶液原液进行反应而

反应没发生，而对照样品（已知的不含污染的 DNA）能够发生，说明可能抑制

作用。