柱式动物RNA提取试剂盒（柱式Trizol）

柱式动物RNA提取试剂盒（柱式Trizol）

英文名称：

运输：常温

保存：常温

有效期：1年

货期：现货

其他：

产品介绍：

柱式法纯化各种动物组织的总RNA

产品及特点 

本产品是动物总 RNA 快速提取试剂动物的柱式升级产品，可用于从各种动物组织（包括白细胞）快速提取总 RNA。跟动物 RNAOUT 相比其主要特点是：

1. 操作更加简单快速，整个过程只需要不到十分钟（对一个样品而言）。

2. RNA 纯度更高，OD260/OD280 一般在 2.0 左右。

3. 一般不含用 RT-PCR 可以检测到的基因组 DNA 污染。

4. 适用于培养细胞、大部分动物组织和部分植物组织。

5. 得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern 杂交、cDNA 合成等实

验

6. 性价比高于进口的柱式 RNA 提取产品。

7. 可以进行无氯仿操作，只是纯度稍微降低，但不影响使用。

运输及保存 常温运输和保存，溶液 A 需要放 4℃长期保存，有效期一年。

自备试剂 氯仿。

使用方法 下面的操作步骤是针对在 1.5 mL 塑料离心管中进行的微量提取的，如果处理

样品量大，请按比例增加各成份的用量并使用大的离心管和离心机。

1. 根据组织细胞类型的不同分为下面及种情况使用：

a) 对贴壁细胞：吸尽培养液，在每 10 平方厘米细胞中加入 1 mL 柱式动物

RNAout 溶液 A，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解并且让基因组

DNA 充分断裂。

b) 对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，在每 1-5×106悬浮细胞中加入

1 mL 柱式动物 RNAout 溶液 A，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解

并且让基因组 DNA 充分断裂。如果是 fibroblasts 或 carcinoma cell，

1 mL 溶液 A 的细胞使用量不要超过 1×106个细胞。

c) 对新鲜组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入 10 mL 或

15 mL 塑料离心管中，每 50-100 mg 组织加 1 mL 柱式动物 RNAout

溶液 A，用 Polytron 剪切式匀浆器匀浆 30 秒左右。对肝、脾、胰、肾等

细胞分裂十分旺盛的组织（细胞中含大量正在复制的 DNA），建议组织的

使用量不要超过 50 mg/ mL 柱式动物 RNAout 溶液 A，否则十分容易产

生 DNA 污染。也可以用液氮研磨：在研钵中加入液氮，再加入 50-100mg

新鲜组织，然后研磨成粉后转移到 1.5mL 离心管中，再加入 1mL 柱式动

物 RNAout 溶液 A，震荡 30 秒混匀。

d) 对 RNALOCKER 保存组织：先用纸吸去 RNALOCKER 液体后再剪切成小块，

其余操作同新鲜组织的处理。

2. 如果进行无氯仿操作（所得 RNA 纯度稍低，但一般不影响后续使用），则

将上步所得的细胞裂解物或匀浆液转移至一个干净的 1.5 mL 塑料离心管

中，12,000 rpm 室温离心 3-5 分钟。

3. 如果进行带氯仿操作（所得 RNA 纯度比免氯仿操作稍高），则将上步所得

的细胞裂解物或匀浆液转移至一个干净的 1.5 mL 塑料离心管中，然后加

入0.2倍体积的自备氯仿(1 mL柱式动物RNAout溶液A需0.2 ml氯仿)，

振荡器上充分振荡混均 30 秒，12,000 rpm 室温离心 3-5 分钟。

4. 将上清液转移到一个干净的 2 mL 塑料离心管中。注意：无氯仿操作时，

离心后管底是细胞碎片和结缔组织纤维。带氯仿操作时，离心后分上下层，

下层有机相和上下层中间含有 DNA 和蛋白质，吸取上清时避免触及，否

则将产生蛋白质和 DNA 污染。为保险起见，可以留下 100 uL 上清液不

取。同时吸取上清时缓慢进行。

5. 加入等体积的柱式动物 RNAout 溶液 B，充分颠倒混匀。

6. 分次（一般需要 2-3 次）将加入柱式动物 RNAout 溶液 B 后的混合液转

移到离心吸附柱中，12,000 rpm 室温离心半分钟，弃穿透液。如果溶液

粘稠，可以延长离心时间到 2 分钟。

7. 加 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12,000 rpm 室温离心半分钟，

弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。

8. 再加 0.3 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12,000 rpm 室温离心半分钟，

弃穿透液。此步可以省略。

9. 再室温 12,000 rmp 干甩半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液

会影响 RNA 的使用。

10. 将离心吸附柱转移到一自备的 RNase-free1.5mL 塑料离心管中，加入

50-100 uL RNA 洗脱液。

11. 室温 12,000 rmp 离心半分钟，离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立即

使用或存放于-80℃待用。

12. RNA 的电泳检测：本试剂盒提取的 RNA 用甲醛变性胶电泳，如果在

非变性的普通琼脂糖胶（in TAE 或 TBE buffer）上电泳，一定要使用

RNA 专用上样液 RNAon（操作详见 RNAon 使用手册），千万不要使用

常用的 DNA 上样液，因为 DNA 上样液没有经过去 RNase 处理，也不能

将 RNA 变性，得到的带型将十分杂乱。

13. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern 杂交，强烈建议用户使

用甲醛变性胶进行 RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子

（BioTechniques，28：414，2000）。

14. RNA 产量产率测定：将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之

间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260

的 RNA=40 μg/mL），进而计算出 RNA 的产量（浓度 X 体积)和产率(RNA

产量/组织用量)。

15. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之

间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分

别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR 等反应。

疑难解答 Q：上样孔里的红色荧光物一定是 DNA 污染吗？

A：不是。用 TAE 或 TBE 电泳液和非变性胶电泳 RNA 时容易产生此现象，天

泽基因初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基

互补或通过硼酸络合（如果使用 TBE 作电泳液的话）形成的复合物，加

RNase 处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议

使用甲醛变性胶电泳和 RNA 专用上样液(如天泽基因的 RNAon)。

Q：如何确认和去处除污染的基因组 DNA？

A：如果怀疑有 DNA 污染，可以用 RNase 处理 RNA 样品，然后再电泳。如

果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组 DNA 污染。进一步确认

可以使用 PCR 扩增法。去除污染的 DNA 可以使用天泽基因的非酶的 DNA

去除剂 DNA Erasol 或 RNase-free DNase，由于 RNase-free DNase 一

般都有残留的 RNase 污染，所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操

作。

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