小鼠胸腺启动调节趋化因子(TARC) ELISA试剂盒
运用双抗夹心ELISA法定量测定血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液和其他生物液体中(TARC)含量。
产品规格: 96T/48T
检测范围: 31.2-2000pg/mL
灵 敏 度: 12.4pg/mL
小鼠胸腺启动调节趋化因子(TARC) ELISA 试剂盒组成:
Item | Specifications(48T/96T) | Storage |
酶标板 | 8×6 /8×12 | 4°C |
标准品 | 1 vial or 2 vial | 4°C |
标准品稀释液 | 5ml/10ml | 4°C |
样品稀释液 | 5ml/10ml | 4°C |
酶标检测抗体 | 60ul/120ul | 4°C |
酶标检测抗体稀释液 | 5ml/10ml | 4°C |
TMB A组份 | 2.5ml/5ml | 4°C(shading light) |
TMB B组份 | 2.5ml/5ml | 4°C |
显色终止液 | 5ml/10ml | 4°C |
洗液 (25X) | 15ml/30ml | 4°C |
封板贴 | 3/5pieces |
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说明书 | 1 copy |
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注意事项:
1.酶标板袋拆封后,尽快将不用的板孔放回,并放入干燥剂,保持酶标板干燥。
2.用户在初次使用试剂盒时,应将试剂盒平衡至室温,各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。
3,TMB A液避光保存。
4,洗板过程非常重要,不充分的洗板易导致假阳性。
5.建议所有标准品、样本都做双份检测。
6.请保持试验过程的连续性,禁止酶标板干燥,因干燥会使酶标板上的生物成分迅速失活。
7.为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和试管。
8.禁止混用不同批次试剂盒内的试剂。
试验所需自备物品:
1. 酶标仪(450nm波长滤光片)
2. 37℃恒温箱,双蒸水或去离子水
3. 自动洗板机
4. 高精度移液器, EP管及一次性吸头: 0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL
5. 吸水纸
洗板方法:
手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的PBt或TBT洗涤缓冲液 至少 0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
样品收集:
1.血清:全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟,取上清即可检测,收集血液的试管应为一次性的无热原,无内毒素试管。
2.血浆:抗凝剂推荐使用EDTA或肝素,样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟,取上清即可检测。避免使用溶血,高血脂样品。
3.组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。然后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
4.细胞培养上清:取细胞培养上清于1000×g离心20分钟,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
5.其它生物样品:1000×g离心20分钟,取上清即可检测
6.样品应清澈透明,悬浮物应离心去除。
7.样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(6个月内检测),避免反复冻融。
操作步骤:
实验开始前,各试剂均应平衡至室温;试剂或样品配制时,均需充分混匀,并尽量避免起泡。
1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品稀释液 100μL,余孔分别加样品稀释液50ul和样品 50μL,注意不要有气泡,轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜,37℃孵育30分钟。
2. 洗板3次,弃去液体,甩干或吸干。每个孔中加入配制好的酶标抗体工作液 100μL(在使用前30 分钟内配制),酶标板加上覆膜,37℃温育30分钟。
3. 弃去孔内液体,甩干,洗板 5 次,每次浸泡 1-2 分钟,小约 350μL/每孔,甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。
4. 提前将TMB A组分和B组分37℃温育15分钟
5. 按用量1:1混合TMB A组分和B形成TMB工作液(用干净的枪头分别吸取B组分和A组分),每孔加 (TMB工作液)90μL,酶标板加上覆膜37℃避光孵育7-10分钟(根据实际显色,情况酌情缩短或延长,但不可超过 30分钟。当标准孔出现明显梯度时,即可终止)。
7. 每孔加终止液 50μL,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。
8. 立即用酶标仪在 450nm波长测量各孔的光密度(OD 值)。应提前打开酶标仪电源,预热仪器,设置好检测程序。
9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。
小鼠胸腺启动调节趋化因子(TARC) ELISA试剂盒:
1. 以标准品的浓度为横坐标, OD值为纵坐标, 绘制标准曲线。 如有设置复孔,则应取其平均值计算。 以标准品的浓度为横坐标, OD值为纵坐标,绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标,标准品的浓度为纵坐标,绘出标准曲线。
2. 推荐使用专业的曲线制作软件,如curve expert 1.3或1.4,在软件界面既可根据样品OD值,由标准曲线查出相应的浓度,乘以稀释倍数;亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
3. 若样品OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测,计算浓度时应乘以稀释倍数。
小鼠胸腺启动调节趋化因子(TARC) ELISA试剂盒 :由于试验操作条件的不同(如操作者,移液技术、洗板技术和稳定条件等),标准曲线的OD值会有所差异。如下数据仅供参考,实验者需依据自己的试验建立标准曲线。
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