小鼠磷酸酶张力蛋白同源物(PTEN) ELISA Kit

  小鼠磷酸酶张力蛋白同源物(PTEN)ELISA试剂盒                

运用双抗夹心ELISA法定量测定血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液和其他生物液体中(PTEN）含量。

产品规格： 96T/48T   

检测范围： 0.156-10ng/mL 

灵 敏 度:   0.061ng/mL

   小鼠磷酸酶张力蛋白同源物(PTEN) ELISA 试剂盒组成：

注意事项：

1．酶标板袋拆封后，尽快将不用的板孔放回，并放入干燥剂，保持酶标板干燥。

2．用户在初次使用试剂盒时，应将试剂盒平衡至室温，各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。

3，TMB A液避光保存。

4，洗板过程非常重要，不充分的洗板易导致假阳性。

5．建议所有标准品、样本都做双份检测。

6．请保持试验过程的连续性，禁止酶标板干燥，因干燥会使酶标板上的生物成分迅速失活。

7．为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。

8．禁止混用不同批次试剂盒内的试剂。

试验所需自备物品:

1. 酶标仪(450nm波长滤光片)

2. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水

3. 自动洗板机

4. 高精度移液器， EP管及一次性吸头： 0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL

5. 吸水纸

 洗板方法：

手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的PBt或TBT洗涤缓冲液 至少 0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。

自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

样品收集:

1.血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。

2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA或肝素，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。

3.组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。然后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4.细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。

5.其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测

6.样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7.样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。

操作步骤:

实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。

1.  加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品稀释液 100μL，余孔分别加样品稀释液50ul和样品 50μL，注意不要有气泡，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育30分钟。

2.  洗板3次，弃去液体，甩干或吸干。每个孔中加入配制好的酶标抗体工作液 100μL（在使用前30 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育30分钟。

3.  弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，每次浸泡 1-2 分钟，小约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。

4.  提前将TMB A组分和B组分37℃温育15分钟

5.  按用量1：1混合TMB A组分和B形成TMB工作液（用干净的枪头分别吸取B组分和A组分），每孔加 (TMB工作液)90μL，酶标板加上覆膜37℃避光孵育7-10分钟（根据实际显色，情况酌情缩短或延长，但不可超过 30分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。

7.  每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。

8.  立即用酶标仪在 450nm波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。

9.  实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。

     小鼠磷酸酶张力蛋白同源物(PTEN)ELISA试剂盒:

1. 以标准品的浓度为横坐标， OD值为纵坐标， 绘制标准曲线。 如有设置复孔，则应取其平均值计算。 以标准品的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。

2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。

     小鼠磷酸酶张力蛋白同源物(PTEN)ELISA试剂盒 ：由于试验操作条件的不同（如操作者，移液技术、洗板技术和稳定条件等），标准曲线的OD值会有所差异。如下数据仅供参考，实验者需依据自己的试验建立标准曲线。