菌种保存液本实验方法的基本原理是,在高盐状态下,硅胶膜专一性地吸附DNA;而在低盐或水溶液状态下,DNA被洗脱下来。此法简便快捷,可在30分钟内同时提纯二十多个样品。从3~5ml培养过夜的含高拷贝质粒的菌液中可以获得10~20μg高纯度的质粒DNA,用于酶切、转化、DNA自动测序和手工测序等。
菌种保存液是一种使用破壁酶(Lyticase)消化去除酵母细胞壁,然后采用一种新型的酵母质粒纯化柱实现从酵母细胞中进行小量质粒快速抽提的试剂盒。
1无需酚氯仿抽提,无需酒精沉淀,12个样品只需约1-1.5小时即可完成。
2试剂盒提供了破壁酶(Lyticase),酵母收集后,加入Lyticase消化去除细胞壁,接着采用传3统碱裂法裂解细胞,然后将获得的上清液转移至结合柱结合DNA,经过离心快速洗涤,最后用洗脱液洗脱出酵母质粒DNA。
4由于采用了高浓度的破壁酶,无需再使用玻璃珠,可以避免因为玻璃珠的机械作用带来的酵母基因组DNA污染。
菌种保存液纯化柱可以结合的质粒量的上限约为20微克。质粒DNA的产量依赖于酵母携带质粒的拷贝数,酵母菌株以及生长条件。通常酵母质粒的拷贝数较低,1.5-5ml培养过夜的酵母抽提获得的质粒DNA量约为1-3微克左右。高拷贝酵母质粒抽提时的得率会大大提高。抽提所得质粒的量与酵母培养浓度、质粒拷贝数、酵母品系等因素有关。
使用本试剂盒抽提得到的酵母质粒DNA可用于各种常规分子生物学实验,如转化、PCR、基于PCR的突变、体外转录、酶切、测序、文库筛选等。
菌种保存液相关产品如下:
60304-50 真菌DNAout
60304-250 真菌DNAout
70901-50 柱式真菌DNAout
100303-50 玻璃珠法柱式真菌DNAout
80926-4 大提柱式真菌DNAout
60707-50 细菌DNAout
60707-250 细菌DNAout
60802-50 柱式细菌DNAout
80927A-4 大提柱式细菌DNAout
80927B-4 大提柱式细菌DNAout
60806-50 一步式细菌DNAout
70702-50 分枝杆菌DNAout
70703-50 柱式分枝杆菌DNAout
60701-30 土壤DNAout
60701-100次 土壤DNAout
71205-50 柱式土壤DNAout
80928-4 大提柱式土壤DNAout
3674-50 一管式病毒DNAout
3674-200 一管式病毒DNAout
70701-50 柱式病毒DNAout
80921-1 96孔板病毒DNAout
80921-5 96孔板病毒DNAout
80101-50 一站式病毒DNA-RNAout
70202-50 柱式酵母质粒DNAout
90607-50 柱式BAC DNAout
90608-5 中提柱式BAC DNAout
60205-50 柱式质粒DNAout
60205-100 柱式质粒DNAout
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